Фотодинамическая терапия солидных опухолей in vitro и in vivo с применением комбинации рибофлавина и наноразмерных апконвертирующих фосфоров | Шолина
1. Agostinis P, Berg K, Cengel KA, Foster TH, Girotti AW, Gollnick SO, Hahn SM, Hamblin MR, Juzeniene A, Kessel D, Korbelik M, Moan J, Mroz P, Nowis D, Piette J, Wilson BC, Golab J. Photodynamic therapy of cancer: an update. CA Cancer J Clin. 2011;61(4):250–81. doi: 10.3322/caac.20114.
2. Dysart JS, Patterson MS. Characterization of Photofrin photobleaching for singlet oxygen dose estimation during photodynamic therapy of MLL cells in vitro. Phys Med Biol. 2005;50(11): 2597–616. doi: 10.1088/0031-9155/50/11/011.
4. Cardoso DR, Libardi SH, Skibsted LH. Riboflavin as a photosensitizer. Effects on human health and food quality. Food Funct. 2012;3(5):487–502. doi: 10.1039/c2fo10246c.
5. Baier J, Maisch T, Maier M, Engel E, Landthaler M, Bäumler W. Singlet oxygen generation by UVA light exposure of endogenous photosensitizers. Biophys J. 2006;91(4):1452–9. doi: 10.1529/biophysj.106.082388.
6. Yang MY, Chang CJ, Chen LY. Blue light induced reactive oxygen species from flavin mononucleotide and flavin adenine dinucleotide on lethality of HeLa cells. J Photochem Photobiol B. 2017;173:325–32. doi: 10.1016/j.jphotobiol.2017.06.014.
7. Ohara M, Fujikura T, Fujiwara H. Augmentation of the inhibitory effect of blue light on the growth of B16 melanoma cells by riboflavin. Int J Oncol. 2003;22(6):1291–5. doi: 10.3892/ijo.22.6.1291.
8. Pass HI. Photodynamic therapy in oncology: mechanisms and clinical use. J Natl Cancer Inst. 1993;85(6):443–56. doi: 10.1093/jnci/85.6.443.
9. Nadort A, Sreenivasan VK, Song Z, Grebenik EA, Nechaev AV, Semchishen VA, Panchenko VY, Zvyagin AV. Quantitative imaging of single upconversion nanoparticles in biological tissue. PLoS One. 2013;8(5):e63292. doi: 10.1371/journal.pone.0063292.
10. Wang M, Abbineni G, Clevenger A, Mao C, Xu S. Upconversion nanoparticles: synthesis, surface modification and biological applications. Nanomedicine. 2011;7(6):710–29. doi: 10.1016/j.nano.2011.02.013.
11. Generalova AN, Rocheva VV, Nechaev AV, Khochenkov DA, Sholina NV, Semchishen VA, Zubov VP, Koroleva AV, Chichkova BN, Khaydukova EV. PEG-modified upconversion nanoparticles for in vivo optical imaging of tumors. RSC Adv. 2016;(36):30089–97. doi: 10.1039/C5RA25304G.
12. Guller AE, Generalova AN, Petersen EV, Nechaev AV, Trusova IA, Landyshev NN, Nadort A, Grebenik EA, Deyev SM, Shekhter AB, Zvyagin AV. Cytotoxicity and non-specific cellular uptake of bare and surface-modified upconversion nanoparticles in human skin cells. Nano Res. 2015;8(5):1546–62. doi: 10.1007/s12274-014-0641-6.
13. Bareford LM, Avaritt BR, Ghandehari H, Nan A, Swaan PW. Riboflavin-targeted polymer conjugates for breast tumor delivery. Pharm Res. 2013;30(7):1799–812. doi: 10.1007/s11095-013-1024-5.
14. Thomas TP, Choi SK, Li MH, Kotlyar A, Baker JR Jr. Design of riboflavin-presenting PAMAM dendrimers as a new nanoplatform for cancer-targeted delivery. Bioorg Med Chem Lett. 2010;20(17):5191–4. doi: 10.1016/j.bmcl.2010.07.005.
15. Sau A, Sanyal S, Bera K, Sen S, Mitra AK, Pal U, Chakraborty PK, Ganguly S, Satpati B, Das C, Basu S. DNA Damage and apoptosis induction in cancer cells by chemically engineered thiolated riboflavin gold nanoassembly. ACS Appl Mater Interfaces. 2018;10(5):4582–9. doi: 10.1021/acsami.7b18837.
16. Jayapaul J, Arns S, Bunker M, Weiler M, Rutherford S, Comba P, Kiessling F. In vivo evaluation of riboflavin receptor targeted fluorescent USPIO in mice with prostate cancer xenografts. Nano Res. 2016;9(5):1319–33. doi: 10.1007/s12274-016-1028-7.
17. Rao PN, Levine E, Myers MO, Prakash V, Watson J, Stolier A, Kopicko JJ, Kissinger P, Raj SG, Raj MH. Elevation of serum riboflavin carrier protein in breast cancer. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 1999;8(11):985–90.
18. Makdoumi K, Goodrich R, Bäckman A. Photochemical eradication of methicillin-resistant Staphylococcus aureus by blue light activation of riboflavin. Acta Ophthalmol. 2017;95(5):498–502. doi: 10.1111/aos.13409.
19. Meinhardt M, Krebs R, Anders A, Heinrich U, Tronnier H. Wavelength-dependent penetration depths of ultraviolet radiation in human skin. J Biomed Opt. 2008;13(4):044030. doi: 10.1117/1.2957970.
Оценка эффективности лечения метастатических изменений в костях.
Диагностика активных очагов воспаления в костях.
Рекомендуемые сроки проведения ПЭТ/КТ с
18F-NaF после лечения
*Для оценки эффективности любого вида лечения желательно провести исследование до начала терапии.
Через 4-6 недель после операции.
После 2 курса ПХТ (если требуется оценка чувствительности опухоли к выбранной схеме лечения).
Через 4-6 недель после последнего введения ПХТ (если требуется оценка эффективности, оконченной терапии).
Через 2-4 недели после радиойодтерапии.
Через 6-8 недель после последнего сеанса облучения.
Подготовка к ПЭТ/КТ с
18F-NaF
Специальной подготовки не требуется. Ограничения в приеме пищи и лекарственных препаратов отсутствуют. Для ускорения выведения радиофармпрепарата из крови пациента рекомендуется за час до исследования употребить 1,0-1,5 литра воды (вода без газа).
Принести с собой
Паспорт.
Направление на исследование.
Выписные эпикризы, результаты УЗИ, сцинтиграфии, КТ и МРТ вместе с дисками (желательно за последние три месяца) и их копии, а также другие данные, позволяющие более подробно изучить анамнез Вашего заболевания.
Результаты нашего исследования вместе с иллюстрациями (если Вы у нас повторно).
Болеутоляющие лекарственные средства (если имеется выраженный болевой синдром).
Если Вы проходите исследование за счет средств фонда обязательного медицинского страхования (ОМС), дополнительно необходимо предоставить направление и медицинский полис (подробнее в разделе ОМС).
Как проходит ПЭТ/КТ
1. В день исследования к заранее назначенным дате и времени пациент прибывает в корпус «Лучевая диагностика, лучевая терапия» в регистратуру №2 (кабинет №100).
2. В регистратуре пациент оформляет статистический талон и приходит на отделение, расположенное в этом же корпусе, в регистратуру отделения (кабинет №134). Здесь пациент вместе с врачом-диагностом заполняет информированное согласие на исследование, передает врачу медицинские документы о заболевании. Сотрудник отделения измеряет вес и рост пациента (эта информация необходима для расчета дозы радиофармпрепарата (РФП)), а также сообщает код медицинской услуги для оплаты.
3. Оплата исследования производится в кассе, расположенной в холле рядом с регистратурой №2 (кабинет №100). Уважаемые пациенты! Оплата исследования может занимать от 15 до 40 минут, учитывайте это и постарайтесь не опаздывать на исследование, особенно если Вы записаны на утро.
4. После оплаты, пациент с платежными документами возвращается в регистратуру отделения (кабинет №134) для завершения процедуры оформления.
5. После оплаты и завершения регистрации пациента приглашают в процедурный кабинет для введения РФП. В процедурном кабинете пациенту будет предложено лечь на кушетку, закрыть глаза и полностью расслабиться. Через 10-15 минут полного покоя будет выполнено внутривенное введение РФП. Инъекция РФП переносится легко, болевых или неприятных ощущений ожидать не стоит. Через 5-10 минут после введения РФП пациенту будет выдана бутилированная вода и предложено пройти в комнату для пациентов.
6. Пациент ожидает сканирование в помещении для пациентов (время ожидания составляет в среднем 30-45 минут). Во время ожидания необходимо допить воду и несколько раз сходить в туалет, который находится в этом же помещении. Внимание! Уважаемые пациенты, напоминаем Вам, что непосредственно после инъекции РФП Вы становитесь источником ионизирующего излучения, а значит, контакт с Вами сопряжен с получением лучевой нагрузки. Учитывая это, в период ожидания сканирования крайне нежелательно выходить за пределы комнаты для пациентов и, тем более, отделения (в холл корпуса, на улицу). По этой же причине в помещении, где Вы ожидаете сканирование, не должны находиться сопровождающие. Предупредите их об этом заранее и предложите подождать Вас за пределами отделения.
7. Из комнаты для пациентов в рассчитанное врачом время пациент приглашается к томографу для сканирования. Внимание! При сканировании на теле пациента не должны находиться предметы, содержащие металл (цепочки, ремни, украшения и т.д.). Убедительная просьба, снимайте с себя все эти предметы до начала исследования, чтобы не тратить время при укладке в томограф. Во время сканирования необходимо находиться в состоянии полного покоя, дыхание должно быть ровным, спокойным, двигаться нельзя. Важно помнить, что любое движение может повлиять на качество изображения. Время нахождения пациента в томографе зависит от роста пациента и выбранного объема сканирования. Например, сканирование в объеме «от головы до стоп» при росте 165-170 см на аппарате ПЭТ/КТ занимает около 30-45 минут.
8. После сканирования пациент отпускается домой. Внимание! Уважаемые пациенты, напоминаем Вам, что после исследования рекомендуется воздержаться от контакта с маленькими детьми и беременными женщинами.
Расписание выдачи заключений
Понедельник: с 17.00 до 20.00
Вторник: с 17.00 до 20.00
Среда: с 17.00 до 20.00
Четверг: с 17.00 до 20.00
Пятница: с 17.00 до 20.00
Уважаемые пациенты! Обращаем Ваше внимание на то, что результаты исследования, проведенного в плановом порядке, предоставляются не ранее, чем через 24 часа после окончания диагностической процедуры. Просим Вас это учитывать при записи на консультации к другим специалистам!
Обсудить свое заключение с врачом-диагностом возможно только на следующий день после процедуры. Связано это с тем, что после введения РФП Вы становитесь источником ионизирующего излучения, а значит, контакт с Вами является причиной получения медицинским персоналом дополнительной лучевой нагрузки.К началу страницы
Налогоплательщики – организации обязаны сообщать в налоговый орган по месту нахождения организации
обо всех обособленных подразделениях российской организации на территории Российской Федерации, через
которые прекращается деятельность этой организации (которые закрываются этой организацией) в течение
трех дней со дня прекращения деятельности российской организации через иное обособленное подразделение
(закрытия иного обособленного подразделения) (пп. 3.1 п. 2
ст. 23 НК РФ).
Способы подачи документов
Перейти
Непосредственно через инспекцию: Адрес и платежные реквизиты Вашей инспекции
По почте с уведомлением о вручении
Онлайн с использованием электронной подписи
Наф-2 — tdm11 — LiveJournal
Про принципы планировки частного дома расскажу. Начну не с принципов, а с ошибок.
Ошибка номер 1, поколенческая. Это интеллигентский шлейф 60-х, утопично предусматривающий культурный отдых вместо непрерывной прополки и копки. Типа сядем с самоваром и будем любоваться окрестностями, а параллельно — читать и/или беседовать. Эту ошибку мы сделали с первой дачей (родители), потом с перестроенной дачей (родители вместе со мной), потом с домом (я вместе с женой). Ну, вы поняли — вот эти террасы и открытые веранды. В нашем случае — лоджия на втором этаже. Можно начать с того, что она просто не нужна, и этим же закончить. Но добавлю, что а) пол лоджии надо хорошо защитить от влаги, б) надо чистить от снега зимой и организовать грамотный водоотвод и б) хорошо утеплить, поскольку под лоджией — жилые помещения. В результате вы получаете… Ничего не получаете, кроме вопросов «Какую же ограду сделать, чтобы она смотрелась не дико?» и большой проблемы «На что опереть крышу?» Плюс тоска по глупо утраченным кв.метрам.
Ошибка номер 2, преклоненческая. Американское кино. Ну, вы поняли — отсутствие «настоящей» прихожей, холодных сеней. Нет, прихожая предусмотрена, она же как бы холл, места вроде хватает. Не буду продолжать, это просто отсутствие опыта, которым — нынешним накопленным — я теперь и делюсь. Больше ошибок за 30 лет не выявлено.
Теперь начальные условия: 1. Два этажа (плюс подвал) 2. Простая двухскатная крыша 3. Без пристроек (параллелепипед) 4. Окна только на дорогу и на задний двор, в стороны — минимум. Одно окно на комнату, никаких «светлых» комнат. 5. Гараж — в периметре дома.
Важные условия, которые обсуждались на берегу: 6. Один единственный вход (плюс ворота гаража). Вход с парадной стороны, никаких выходов «на двор». Мы не против второго «рабочего» выхода, но с ним нормальную планировку просто не получить. Со вторым входом вы получаете в нагрузку коридор, ещё одну прихожую и крыльцо. Это огромные метры, товарищи, и… избегайте коридоров, короче. Это всегда некрасиво и неудобно, это от придуманной безысходности. 7. Создание «коммуникационного колодца»: сведение мокрых зон, разводки воды и отопления, канализации, вентиляции в единую вертикальную структуру. Обычно так само получается, поскольку многое привязано к дымовой трубе, но сколько я насмотрелся в старых домах этих горизонтальных трубопроводов, которые тянутся чуть ли не к противоположному углу дома (я не про отопление, конечно). 8. «Посадить» крышу пониже, из чисто эстетических соображений. Простой двухэтажный дом под простой крышей выглядит утилитарным бараком. Мы решили сделать фактически мансарду, но под «неломанной крышей», переведя жилой метраж под низкой частью крыши в помещения типа «чулан». 9. Окна делать только в длинной стене комнаты. Это очевидное решение, когда есть выбор, в отличие от многоквартирных домов. Не забывайте о такой возможности — это фишка «своего» дома. 10. Сделать арку в большую комнату.
Получился такой проект: Первый этаж:
Оранжевым нарисованы два позже отгороженных объёма: раздевалка-теплушка для рабочей одежды (примыкает к стене санузла, дверь в реале сдвинута вверх по отношению к обозначенной на чертеже) и холодная прихожая на месте бывшего пустого крыльца. Коричневый прямоугольник — гардероб длиной 2 м и высотой под потолок. Он очень важен для зонирования дома. За его спиной находятся: а) лестница в подвал;
б) лестница на второй этаж; все лестницы стальные — это важно. На этой лестнице за спиной шкафа — тонкая декоративная перегородка, аналогичная видимой на фото.
в) вход в гараж. За дверью — площадка перед дверью в гараж и спуск в подвал.
Второй этаж:
По бокам — «съеденные» мансардой боковые объёмы — чуланы. Желтым — отгороженная позже часть лоджии. В верхнем холле — книги, он не пустой. ===== Не очень понятно, зачем семье из четырёх человек четыре спальни. Тем более, что дети были уже близко к окончанию школы. Ну что сказать… — решение всё равно оказалось верным. Последние свои годы с нами жила тёща, как раз на первом этаже. Детишки с семьями приезжают минимум на два месяца, ну и в течение года иногда. Да и два оборудованных рабочих места нынче необходимы.
Об основных направлениях деятельности субъектов бюджетного планирования муниципального образования Пуровский район с использованием программно — целевых методов бюджетного планирования и мерах по повышению результативности бюджетных расходов от 30.12.2011
МУНИЦИПАЛЬНОЕ ОБРАЗОВАНИЕ ПУРОВСКИЙ РАЙОН
ГЛАВА РАЙОНА
П О С Т А Н О В Л Е Н И Е
30 декабря 2011 г. № 617-ПГ г. Тарко-Сале
Об основных направлениях деятельности субъектов бюджетного планирования муниципального образования Пуровский район с использованием программно-целевых методов бюджетного планирования и мерах по повышению результативности бюджетных расходов
В целях реализации постановления Правительства Российской Федерации от 22 мая 2004 года № 249 «О мерах по повышению результативности бюджетных расходов», постановления Администрации Ямало-Ненецкого автономного округа от 31 июля 2008 года № 405-А «Об основных направлениях деятельности субъектов бюджетного планирования Ямало-Ненецкого автономного округа с использованием программно-целевых методов бюджетного планирования и мерах по повышению результативности бюджетных расходов», внедрения методов программно-целевого бюджетного планирования, ориентированного на результат, при формировании расходов бюджета муниципального образования Пуровский район
ПОСТАНОВЛЯЮ:
1. Утвердить:
1.1. Положение о докладах о результатах и основных направлениях деятельности субъектов бюджетного планирования муниципального образования Пуровский район, согласно приложению № 1 к настоящему постановлению.
1.2. Методические рекомендации по подготовке докладов о результатах и основных направлениях деятельности субъектов бюджетного планирования муниципального образования Пуровский район, согласно приложению № 2 к настоящему постановлению.
1.3. Перечень участников процесса перевода на программно-целевой метод бюджетного планирования, ориентированный на результат, согласно приложению № 3 к настоящему постановлению.
1.4. Методические рекомендации по подготовке Сводного доклада о результатах и основных направлениях деятельности субъектов бюджетного планирования муниципального образования Пуровский район, согласно приложению № 4 к настоящему постановлению.
2. Субъектам бюджетного планирования муниципального образования Пуровский район при подготовке докладов о результатах и основных направлениях деятельности применять Методические рекомендации по подготовке докладов о результатах и основных направлениях деятельности субъектов бюджетного планирования муниципального образования Пуровский район и прилагаемые к ним формы.
3. Управлению информационно-аналитических исследований и связей с общественностью Администрации Пуровского района (Е.В. Кузнецов) разместить настоящее постановление на официальном сайте муниципального образования Пуровский район.
4. Опубликовать настоящее постановление в Пуровской районной муниципальной общественно-политической газете «Северный луч».
5. Контроль исполнения настоящего постановления возложить на заместителя Главы Администрации района по вопросам экономики Т.Я. Хоптяр.
И.п. Главы района Н.А.Фамбулова
Приложения к документу:
Влияние нафталина на фотохимическую активность фотосистемы 2
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: нафталин, фотосистема 2, переменная и замедленная флуоресценция хлорофилла, отделенные листья гороха, тилакоидные мембраны, фотосинтетические пигменты.
Аннотация
Изучали действие одного из типичных полициклических ароматических углеводородов, нафталина (Наф), на фотосинтетическую активность фотосистемы 2 (ФС-2) в препаратах тилакоидных мембран и листьях двадцатидневных растений гороха. Образцы инкубировали в воде в присутствии Наф (0,078, 0,21 и 0,78 мМ) при освещении белым светом (15 мкмоль квантов м–2 с–1) в течение 0,2–24 ч. Активность ФС-2 определяли с помощью методов быстрой и замедленной флуоресценции хлорофилла a. Инкубация образцов в водных растворах Наф при концентрациях 0,21 и 0,78 мМ приводила к понижению максимальной квантовой эффективности (Fv/Fm) ФС-2, значительным изменениям в полифазной кинетике индукции флуоресценции (OJIP) и уменьшению амплитуд быстрой и медленных компонент замедленной флуоресценции хлорофилла a. Увеличивалась также скорость выхода электролитов из листьев, предварительно инкубированных в растворе Наф (0,21 мМ). Заметное снижение упомянутых флуоресцентных параметров в препаратах тилакоидных мембран наблюдали уже при концентрации Наф 0,03 мМ и 12-минутном выдерживании образцов. Содержание Хл a и b, а также каротиноидов (мг на 1 г сырого веса) изменялось незначительно. Обнаружено, что квантовые выходы переноса электрона от QA к QB (ϕET2o), а также вплоть до акцепторов фотосистемы 1 (ϕRE1o) снижаются. Эти результаты объясняются увеличением количества QВ-невосстанавливающих центров ФС-2, которое возрастало при увеличении концентрации Наф и времени экспозиции. Действие Наф, снижающее активность ФС-2, частично снималось в присутствии донора электрона, аскорбата натрия. На основе полученных данных предполагается, что Наф нарушает интактность клеточных мембран и действует, в основном, на акцепторную и, в меньшей степени, на донорную сторону ФС-2.
ASTM Тендер — оферент: NAF 2 S.p.A.
ВНИМАТЕЛЬНО ПРОЧИТАЙТЕ СЛЕДУЮЩИЕ ОГРАНИЧЕНИЯ И УСЛОВИЯ, КАСАЮЩИЕСЯ ДОСТУПА К ДАННОМУ РАЗДЕЛУ ВЕБ-САЙТА
Ниже приводится важная информация в отношении общего добровольного тендерного предложения ( offerta pubblica di acquisto volontaria totalitaria ) (« Offer ») для обыкновенных акций (« акций ») ASTM SpA (« Эмитент »). что NAF 2 S.П.А. объявлено с уведомлением, опубликованным в соответствии с пунктом 1 статьи 102 Законодательного декрета 58/1998 20 февраля 2021 года.
Предложение запускается в Италии, поскольку Акции котируются на Mercato Telematico Azionario , организованном и управляемом Borsa Italiana S.p.A., и, за исключением случаев, указанных ниже, подлежат обязательствам по раскрытию информации и процедурным требованиям, предусмотренным итальянским законодательством.
Предложение будет запущено путем публикации документа предложения, подлежащего утверждению Национальным комиссаром по обществу и борсе (CONSOB) («Документ предложения »).Документ предложения будет содержать полное описание условий предложения, включая условия принятия.
В той степени, в которой это применимо, Предложение также проводится в Соединенных Штатах в соответствии с применимыми положениями Раздела 14 (e) Закона США о фондовых биржах 1934 года («Закон о биржах ») и Положения 14E, принятого в соответствии с Законом о биржах. , без ущерба для применимых исключений, предусмотренных Правилом 14d-1 Закона о биржах (« Трансграничные исключения »).
Документ предложения, переведенный на английский язык, будет доступен держателям Акций, проживающим в США. Английская версия документа с предложением будет просто любезным переводом, а итальянская версия документа с предложением будет единственным документом, представленным в CONSOB для утверждения.
Предложение не проводилось и не будет проводиться или распространяться в Канаде, Японии и Австралии, а также в любой другой стране, в которой такое Предложение не разрешено без разрешения компетентных органов или других обязательств со стороны Претендента ( вместе « Другие страны »).
Принятие предложения сторонами, проживающими в других странах, может быть связано с определенными обязательствами или ограничениями, предусмотренными законом или нормативными положениями. Стороны, желающие принять участие в Предложении, несут исключительную ответственность за соблюдение этих законов, и, следовательно, перед принятием предложения эти стороны должны проверить наличие и применение любых таких обязательств или ограничений, и им настоятельно рекомендуется проконсультироваться со своими собственные советники.
Любой, кто намеревается получить доступ к этому разделу веб-сайта и просмотреть Документ предложения и другие документы, опубликованные в нем, должен внимательно прочитать и полностью осознавать содержащуюся в нем информацию.
Эта информация, включенная в этот раздел веб-сайта, не представляет собой предложение о покупке или ходатайство о предложении покупки акций Эмитента. В начале Срока предложения, в соответствии с действующим законодательством, Оферент опубликует Документ предложения, который акционеры Эмитента должны внимательно изучить.
Нажимая кнопку «Я ПРИНИМАЮ», вы заявляете и гарантируете, что физически не находитесь и не проживаете в других странах, и что вы прочитали, поняли, полностью принимаете и соглашаетесь соблюдать все вышеуказанные ограничения.
ПРИНЯТЬ ОТКАЗАТЬ
NaF ПЭТ / КТ для оценки ответа на метастазы рака простаты в кости, подвергнутые однофракционной стереотаксической абляционной лучевой терапии тела | Радиационная онкология
1.
Келли С.П., Андерсон В.Ф., Розенберг П.С., Кук МБ. Прошлая, текущая и будущая заболеваемость и бремя метастатического рака простаты в Соединенных Штатах. Eur Urol Focus. 2018; 4 (1): 121–7. https://doi.org/10.1016/j.euf.2017.10.014.
Артикул
PubMed
Google Scholar
2.
Mazzone E, Preisser F, Nazzani S и др. Расположение метастазов у современных больных раком простаты влияет на смертность от рака. Clin Genitourin Cancer. 2018; 16 (5): 376–384.e1. https://doi.org/10.1016/j.clgc.2018.05.016.
Артикул
PubMed
Google Scholar
3.
Muldermans JL, Romak LB, Kwon ED, Park SS, Olivier KR. Стереотаксическая лучевая терапия тела при олигометастатическом раке простаты. Int J Radiat Oncol Biol Phys.2016; 95 (2): 696–702. https://doi.org/10.1016/j.ijrobp.2016.01.032.
Артикул
PubMed
PubMed Central
Google Scholar
4.
Сутера П., Кламп Д.А., Калаш Р. и др. Первые результаты многоцентрового исследования фазы 2 стереотаксической абляционной лучевой терапии при олигометастатическом раке. Int J Radiat Oncol. 2019; 103 (1): 116–22. https://doi.org/10.1016/j.ijrobp.2018.08.027.
Артикул
Google Scholar
5.
Бриджит Кунц Б.Ф., редактор А. Стереотаксическая лучевая терапия для тела при олигометастатическом раке простаты: охота за серебряной пулей. DOI: https: //doi.org/10.1016/j.ijrobp.2017.05.020.
6.
Ягару А., Миттра Е., Дик Д.В., Гамбхир СС. Проспективная оценка сцинтиграфии 99mTc MDP, 18F NaF ПЭТ / КТ и 18F FDG ПЭТ / КТ для выявления метастазов в скелете. Mol Imaging Biol. 2012. 14 (2): 252–9. https://doi.org/10.1007/s11307-011-0486-2.
Артикул
PubMed
PubMed Central
Google Scholar
7.
Джамбор I, Куисма А., Рамадан С. и др. Проспективная оценка сцинтиграфии планарной кости, ОФЭКТ, ОФЭКТ / КТ, ПЭТ / КТ 18F-NaF и МРТ всего тела 1,5 Тл, включая DWI, для обнаружения метастазов в кости у пациентов с раком груди и простаты высокого риска: клиническое испытание SKELETA. Акта Онкол (Мадр). 2016; 55 (1): 59–67. https://doi.org/10.3109/0284186X.2015.1027411.
Артикул
Google Scholar
8.
Миёси Ю., Уэмура К., Кавахара Т. и др.Прогностическое значение индекса автоматического сканирования костей у мужчин с метастатическим устойчивым к кастрации раком простаты, получавшим энзалутамид или абиратерона ацетат. Clin Genitourin Cancer. 2017; 15 (4): 472–8. https://doi.org/10.1016/j.clgc.2016.12.020.
Артикул
PubMed
Google Scholar
9.
Wakabayashi H, Nakajima K, Mizokami A, et al. Сцинтиграфия костей как новый биомаркер визуализации: взаимосвязь между индексом сканирования костей и маркерами метаболизма костей у пациентов с раком простаты с метастазами в кости.Ann Nucl Med. 2013; 27 (9): 802–7. https://doi.org/10.1007/s12149-013-0749-x.
CAS
Статья
PubMed
PubMed Central
Google Scholar
10.
Even-Sapir E, Metser U, Mishani E, Lievshitz G, Lerman H, Leibovitch I. Выявление костных метастазов у пациентов с раком простаты высокого риска: планарная сцинтиграфия кости 99mTc-MDP, одно- и мульти-поле зрения SPECT, 18F-фторидный ПЭТ и 18F-фторидный ПЭТ / КТ. J Nucl Med.2006; 47 (2): 287–97 DOI: 47/2/287.
PubMed
PubMed Central
Google Scholar
11.
Schirrmeister H, Glatting G, Hetzel J, et al. Проспективная оценка клинической ценности сканирования плоских костей, ОФЭКТ и (18) F-меченого NaF ПЭТ при впервые выявленном раке легкого. J Nucl Med. 2001; 42 (12): 1800–4 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11752076. По состоянию на 21 августа 2018 г.
CAS
PubMed
Google Scholar
12.
Блау М., Ганатра Р., Бендер Массачусетс. 18 F-фторид для визуализации костей. Semin Nucl Med. 1972; 2 (1): 31–7 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/5059349. По состоянию на 6 декабря 2018 г.
CAS
Статья
Google Scholar
13.
Grant FD, Fahey FH, Packard AB, Davis RT, Alavi A, Treves ST. Скелетный ПЭТ с 18F-фторидом: применение новой технологии к старому индикатору. J Nucl Med. 2007. 49 (1): 68–78. https://doi.org/10.2967/jnumed.106.037200.
Артикул
PubMed
Google Scholar
14.
Even-Sapir E, Metser U, Flusser G, et al. Оценка злокачественного заболевания скелета: первоначальный опыт с 18F-фторидным ПЭТ / КТ и сравнение 18F-фторидного ПЭТ и 18F-фторидного ПЭТ / КТ. J Nucl Med. 2004. 45 (2): 272–8.
PubMed
Google Scholar
15.
Hicks RJ, Hofman MS. Сохранится ли роль ОФЭКТ-КТ в онкологии в эпоху ПЭТ-КТ? Нат Рев Клин Онкол. 2012; 9 (12): 712–20. https://doi.org/10.1038/nrclinonc.2012.188.
CAS
Статья
PubMed
Google Scholar
16.
Арвола С., Джамбор И., Куисма А. и др. Сравнение стандартизованных значений поглощения 99m Tc-HDP ОФЭКТ / КТ и 18 F-NaF ПЭТ / КТ при метастазах в кости рака груди и простаты. Eur J Nucl Med Mol Imaging Res. 2019; 9 (1). https://doi.org/10.1186/s13550-019-0475-z.
17.
Siva S, Bressel M, Murphy DG, et al. Стереотаксическая абативная лучевая терапия тела (SABR) при олигометастатическом раке простаты: проспективное клиническое испытание.Eur Urol. 2018; 0: 0. https://doi.org/10.1016/j.eururo.2018.06.004.
Артикул
Google Scholar
18.
Cox BW, Spratt DE, Lovelock M, et al. Консенсусное руководство международного консорциума по радиохирургии позвоночника по определению целевого объема в стереотаксической радиохирургии позвоночника. Int J Radiat Oncol. 2012; 83 (5): e597–605. https://doi.org/10.1016/j.ijrobp.2012.03.009.
Артикул
Google Scholar
19.
Cysouw M, Bouman-Wammes E, Hoekstra O, et al. Прогностическая ценность [18 F] -фторметилхолина позитронно-эмиссионной томографии / компьютерной томографии перед стереотаксической лучевой терапией тела при олигометастатической радиационной онкологии рака простаты. Int J Radiat Oncol Biol Phys. 2018; 101 (2): 406–10. https://doi.org/10.1016/j.ijrobp.2018.02.005.
Артикул
PubMed
Google Scholar
20.
Хан С, Ву С, Ким Й.Дж., Сух Ч.Влияние ПЭТ с 68 Ga-PSMA на лечение пациентов с раком простаты: систематический обзор и метаанализ. Eur Urol. 2018; 74 (2): 179–90. https://doi.org/10.1016/j.eururo.2018.03.030.
CAS
Статья
PubMed
Google Scholar
21.
Zacho HD, Nielsen JB, Afshar-Oromieh A, et al. Проспективное сравнение ПЭТ / КТ с 68Ga-PSMA, ПЭТ / КТ с 18F-фторидом натрия и диффузионно-взвешенной МРТ для выявления метастазов в кости при биохимически рецидивирующем раке простаты.Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2018; 45 (11): 1884–97. https://doi.org/10.1007/s00259-018-4058-4.
CAS
Статья
PubMed
PubMed Central
Google Scholar
22.
Упримный Ц, Свириденка А, Фриц Дж. И др. Сравнение ПЭТ / КТ [68Ga] Ga-PSMA-11 с ПЭТ / КТ [18F] NaF в оценке метастазов в кости у пациентов с метастатическим раком простаты до радионуклидной терапии. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2018; 45 (11): 1873–83. https: // doi.org / 10.1007 / s00259-018-4048-6.
CAS
Статья
PubMed
PubMed Central
Google Scholar
23.
Шива С., Каллахан Дж., Прайор Д., Мартин Дж., Лоурентчук Н., Хофман М.С. Применение позитронно-эмиссионной томографии 68 Ga для специфического мембранного антигена простаты в диагностике и оценке ответа на рецидив почечно-клеточного рака. J Med Imaging Radiat Oncol. 2017; 61 (3): 372–8. https://doi.org/10.1111/1754-9485.12590.
Артикул
PubMed
Google Scholar
О вакансиях в NAF
Что такое Занятость NAF?
Работа в NAF считается занятостью на федеральном уровне. Однако он отличается от
занятость на федеральной государственной службе, поскольку деньги использовались для выплаты заработной платы
Сотрудники NAF происходят из другого источника.Должности государственной службы оплачиваются
за счет денег, ассигнованных Конгрессом. Деньги NAF, с другой стороны, генерируются самостоятельно.
клубами ВВС, боулинг-центрами, полями для гольфа и другими мероприятиями, в которых используются
Сотрудники NAF.
У нас есть два типа позиций NAF: «гибкие» и «обычные».«Гибкие сотрудники
иметь графики работы, которые зависят от потребностей деятельности. Эти сотрудники могут
работать от нуля до 40 часов в неделю и не получать
преимущества. Обычные сотрудники работают от 20 до 40 часов в неделю в зависимости от должности.
требования, и имеют право на получение пособий.
Объем деятельности отдела кадров
Обслуживает более 25000 позиций NAF на объектах ВВС США по всему миру
Консультирует и предоставляет персонал, классификацию должностей, трудовые отношения и отношения с сотрудниками
услуги кураторам сотрудников НАФ
Консультирует и оказывает помощь сотрудникам NAF
Управляет программой обучения всех военнослужащих и служащих дивизии
Разрабатывает и планирует военное вспомогательное обучение, подготовку базовых станций и OJT.
программа; следит за дополнительным обучением гражданского населения
Льготы
Сотрудники с регулярными назначениями имеют право на следующие льготы и
компенсация: страхование здоровья и жизни, премии, пенсионный план, 401 (k), годовой
отпуск, больничный, военный, административный отпуск, декретный отпуск, отцовство
отпуск и судебный отпуск, сверхурочные, отпускные, воскресные взносы, разница между сменами,
компенсация работникам и компенсация по безработице.
Сотрудники с гибкими назначениями имеют право на следующие льготы и
Компенсация: оплата сверхурочной работы, разница между сменами, премии, компенсация работникам и
компенсация по безработице.
Другие преимущества: как правило, все программы обслуживания (кроме столовых) могут
использоваться лицами, которые участвуют в миссии ВВС.Перечислены некоторые
программ, которые могут быть доступны вам как сотруднику.
Мероприятия и программы
Информация о боулинг-центре,
Билетная касса и экскурсионное бюро
База отдыха
Поле для гольфа
Центр навыков авто
Центр ремесел навыков
Фитнес-центр
Центр деревообработки
Молодежный центр
Аренда оборудования
Базовые рестораны
Центр развития ребенка
NAF HRO — Неллис Лайф
Все сотрудники ВВС ВВС США должны пройти следующие тренинги по общей осведомленности (TFAT) и технике безопасности в течение 60 дней с момента первоначального трудоустройства.
— AF Ориентация на нового сотрудника (AF NEO) — единовременное требование при первоначальном приеме на работу. — Борьба с торговлей людьми (CTIP) — единовременное требование при приеме на работу до дальнейшего уведомления. — Закон об уведомлениях и федеральных служащих о борьбе с дискриминацией и преследовании (NoFEAR) — один раз при приеме на работу, затем каждые 24 месяца. — Свобода вероисповедания — один раз при приеме на работу, затем каждые 36 месяцев. — Безопасность операций (OPSEC) — один раз при приеме на работу, затем каждые 12 месяцев. — Force Protection — один раз при приеме на работу, затем каждые 12 месяцев. — Курс по основам управления рисками в ВВС — после первого приема на работу до дальнейшего уведомления. — Система экологического менеджмента — Общая осведомленность — После первого приема на работу до дальнейшего уведомления.
-Cyber Awareness (только для сотрудников с доступом к правительственному компьютеру) — один раз при приеме на работу, затем каждые 12 месяцев.
Это обучение доступно на веб-сайте ADLS по адресу https: // golearn.adls.af.mil/login.aspx. У вас должна быть карта общего доступа (CAC), чтобы получить полный доступ к сайту.
Все курсы подготовки военно-воздушных сил (AFSVT), а ранее курсы FSKC, теперь необходимо регистрировать и проходить через веб-сайт GeniusSIS. См. Инструкции по настройке учетной записи Genius, чтобы узнать, как настроить учетную запись. Genius Account Setup Learner (прикрепить PDF) https://afservices.geniussis.com/PublicWelcome.aspx
ПРИМЕЧАНИЕ. Все курсы AFSVT должны быть зарегистрированы с использованием регистрационной формы на веб-сайте GeniusSIS, одобрены и направлены вашим менеджером производственного объекта и / или шефом полетов, а также вашим менеджером по обучению.
Для получения дополнительной подготовки по вопросам карьеры / профессионального развития посетите веб-сайт Air Force Portal по адресу www.my.af.mil . С этого сайта вы также можете получить доступ к другим сайтам обучения, таким как;
Virtual Force Development Center (vFDC), AF e-Learning и myPers!
За дополнительной информацией обращайтесь к специалисту по обучению NAF по телефону [email protected]
NAF Отдел кадров
Общие
Что такое трудоустройство NAF?
Занятость
NAF считается занятостью на федеральном уровне.Однако это отличается от найма на федеральную государственную службу, потому что деньги, используемые для выплаты заработной платы служащим NAF, поступают из другого источника. Должности государственной службы оплачиваются деньгами, ассигнованными Конгрессом. Деньги NAF, с другой стороны, генерируются клубами ВВС, боулинг-центрами, полями для гольфа и другими видами деятельности, в которых используются сотрудники NAF.
У нас есть два типа позиций NAF: «гибкие» и «обычные». У гибких сотрудников есть графики работы, которые зависят от потребностей деятельности.Эти сотрудники могут работать от нуля до 40 часов в неделю и не получают пособий. Обычные сотрудники работают от 20 до 40 часов в неделю в зависимости от требований к должности и имеют право на получение пособий.
Преимущества
Сотрудники, имеющие регулярные назначения, имеют право на следующие льготы и компенсации:
Страхование здоровья и жизни
награды
пенсионный план
401 (к)
ежегодный отпуск
больничный
военный отпуск
административный отпуск
декретный отпуск
отцовский отпуск
судебный отпуск
сверхурочная работа
отпускные
Воскресный взнос
дифференциал переключения
компенсация работникам
Пособие по безработице
здравоохранение
уход за иждивенцем FSA
длительный уход
Сотрудники с гибкими контрактами имеют право на следующие льготы и компенсации:
Сверхурочная работа
дифференциал переключения
награды
компенсация работникам
пособие по безработице.
Другие льготы: Как правило, все программы обслуживания могут использоваться лицами, которые участвуют в миссии ВВС. Ниже перечислены некоторые программы, которые могут быть доступны вам как сотруднику.
Деятельность включает:
Боулинг-центр
Билеты и экскурсионное бюро
База отдыха
Поле для гольфа
Центр навыков авто
Фитнес-центр
Центр искусств и ремесел
Молодежный центр
Аренда оборудования
Базовые рестораны
Центр развития ребенка
Выездное обследование NAF
Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie
Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.
Настройка вашего браузера для приема файлов cookie
Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:
В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки вашего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г.,
браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.
Почему этому сайту требуются файлы cookie?
Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie
потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.
Что сохраняется в файле cookie?
Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.
Как правило, в cookie-файлах может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт
не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к
остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.
Биохимические свойства новой клеточной мишени для антидиабетических препаратов
Abstract
Фактор аутофагии лишения питательных веществ-1 (NAF-1) (синонимы: Cisd2, Eris, Miner1 и Noxp70) представляет собой кластерный белок [2Fe-2S], иммунно обнаруживаемый как в эндоплазматическом ретикулуме (ER), так и во внешних митохондриях. мембрана.Он был вовлечен в патологию человека (синдром Вольфрама 2) и в опосредованную BCL-2 антагонизацию зависимой от Beclin 1 аутофагии и угнетение запасов кальция в ER. Чтобы получить представление о функциях NAF-1, мы исследовали биохимические свойства его кластера 2Fe-2S и чувствительность этих свойств к небольшим молекулам. Структура растворимого домена NAF-1 показывает, что он образует гомодимер с каждым протомером, содержащим кластер [2Fe-2S], связанный 3 Cys и одним His. NAF-1 продемонстрировал необычную способность переносить свой кластер 2Fe-2S на апо-акцепторный белок (за которым следует in vitro по спектрофотометрии и с помощью нативного электрофореза PAGE) и переносить железо в интактные митохондрии в клеточных моделях (отслеживается с помощью флуоресцентной визуализации. с флуоресцентными сенсорами железа, нацеленными на митохондрии).Важно отметить, что препарат пиоглитазон отменяет способность NAF-1 переносить кластер на акцепторные белки и железо в митохондрии. Аналогичные эффекты были обнаружены у антиоксиданта ресвератрола, способствующего борьбе с диабетом и способствующего долголетию. Эти результаты показывают, что NAF-1 является ранее не идентифицированной клеточной мишенью противодиабетических тиазолидиндионовых препаратов, таких как пиоглитазон и природного продукта ресвератрола, оба из которых взаимодействуют с белком и стабилизируют его лабильный кластер [2Fe-2S].
Образец цитирования: Tamir S, Zuris JA, Agranat L, Lipper CH, Conlan AR, Michaeli D, et al.(2013) Фактор аутофагии лишения питательных веществ-1 (NAF-1): биохимические свойства новой клеточной мишени для антидиабетических препаратов. PLoS ONE 8 (5):
e61202.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0061202
Редактор: Яаков Коби Леви, Институт науки Вейцмана, Израиль
Поступила: 11 декабря 2012 г .; Дата принятия: 7 марта 2013 г .; Опубликовано: 22 мая 2013 г.
Финансирование: Эта работа была поддержана следующими средствами: грант Израильского научного фонда (ISF) ISF 863/09 предоставлен RN; ISF 141/06 и грант от канадских друзей Еврейского университета, присужденный ZIC; ISF 214/08 и грант Европейского Союза FP7 — Мария Кюри 447, предоставленные RM; грант 2T32GM007240-29 на обучение клеточной и молекулярной генетике (CMG), предоставленный ARC; Национальные институты здравоохранения (NIH) GM54038 и NIH GM101467 в PAJ; и грант 5T32DK007233-34 по обучению гемам и белкам крови компании JAZ.Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.
Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что конкурирующих интересов не существует.
Введение
NAF-1 (фактор аутофагии-1, лишающий питательных веществ, синонимы: ERIS, Miner1) является членом недавно открытого семейства белков железо-сера (FeS), кодируемых генами Cisd , которые определяются уникальным Аминокислотная последовательность CDGSH в их домене связывания кластера FeS [1] — [4].Интерес к NAF-1 в последнее время возрос, потому что этот ген находится в области хромосомы, связанной с развитием нейронов [5], и теперь известно, что он имеет решающее значение для поддержания скелетных мышц [6] и для обеспечения долголетия [7], [8]. Более того, ошибка транскрипционного сплайсинга приводит к редкому, но серьезному заболеванию, называемому синдромом Вольфрама 2 [9], которое связано с нарушениями слуха, тяжелой слепотой, диабетом и более низкой продолжительностью жизни. Белок, который локализован как в ER [9], так и в митохондриях [7], функционально вовлечен в аутофагию клетки, возможно, как медиатор антагонизма Bcl-2 зависимой от Beclin-1 аутофагии на поверхности ER [10 ].
Кристаллическая структура NAF-1 [1] показала, что это гомодимерный белок [2Fe-2S], и каждый протомер содержит один кластер 2Fe-2S, связанный с белком обычной координационной геометрией 3-Cys-1-His (рис. . 1). Структура несет подобную складку основы [1] его паралогу mitoNEET (Fig. S1) [2], ранее идентифицированной мишени тиазолидиндионового (TZD) класса противодиабетических препаратов [11], [12]. Недавняя работа предположила, что существует дополнительная митохондриальная мишень для этого класса лекарств [13], поэтому мы попытались определить, был ли NAF-1 истинной мишенью для TZD.Важно отметить, что эти результаты имеют отношение к разработке альтернативных методов лечения диабета типа II, поскольку до сих пор фармакологические (как положительные, так и вредные) эффекты препаратов TZD были широко связаны с рецептором гамма-PPARγ, активируемым пролифератором пероксисом [11] — [16].
Рисунок 1. Структура НАФ-1.
( A ) Ленточные диаграммы растворимых частей NAF-1 (аминокислоты 57–135), полученные из опубликованных рентгеновских анализов (1) (код PDB 3FNV). Белок гомодимерный и состоит из двух основных доменов — бета-кэпа и кластерного связывающего домена, где каждый протомер содержит кластер [2Fe-2S] (сера и железо изображены желтыми и оранжевыми сферами соответственно).( B ) Увеличение одного из сайтов связывания кластера NAF-1 с выделением единственного координирующего остатка His и трех координирующих остатков Cys.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0061202.g001
Поскольку мы недавно определили функциональную роль mitoNEET как белка-переносчика кластера, перенос железа которого в митохондрии отменяется препаратами TZD [17], мы исследовали способность передачи кластера НАФ-1. Было обнаружено, что передача от NAF-1 к апо-акцепторам происходит только тогда, когда кластеры [2Fe-2S] были окислены (состояние [2Fe-2S] 2+ ) и свободные цистеины акцепторного белка были восстановлены (свободная тиоловая форма ).Добавление глутатиона (GSH), физиологического восстановителя, было эффективным при подготовке апо-акцепторного белка для переноса кластера. Добавление NAF-1 к клеткам приводит к накоплению железа в митохондриях. Препарат пиоглитазон против диабета типа II стабилизировал высвобождение кластеров NAF-1 [2Fe-2S] и предотвращал перегрузку железом в митохондриях. Замена единственного His-лиганда в кластере 2Fe-2S на Cys стабилизировала кластер, ингибировала перенос кластера на апо-акцепторные белки и подавляла перенос железа в митохондрии.Эти эффекты аналогичны эффектам, ранее обнаруженным для mitoNEET [17], и позволяют предположить, что NAF-1 может быть настоящей митохондриальной мишенью для TZD. Тем не менее, что интересно, натуральный продукт ресвератрол, способствующий антидиабетической активности и долголетию, показал аналогичное влияние на стабилизацию кластеров и ингибирование перегрузки железом, особенно для NAF-1. Эти результаты предполагают ранее неизвестную и важную роль NAF-1 в ответе на окислительный стресс, который, как известно, является основным фактором возникновения диабета типа II и выступает в качестве основной причины старения.
Экспериментальные процедуры
Все материалы, использованные в этой работе, были из лучших доступных коммерческих сортов. Митохондриальный сенсор железа красный родамин B — [(1,10-фенантролин-5-ил) аминокарбонил] бензиловый эфир (RPA) был получен, как описано в [18]. Пиоглитазон (Bosche Scientific, Нью-Брансуик, Нью-Джерси) растворяли в 100% ДМСО и разводили в тестовой среде перед использованием в клеточных анализах. Ресвератрол (Cayman Chemical, Ann Arbor MI) растворяли в 100% этаноле и разводили в тестовой среде перед использованием в клеточных анализах.
Экспрессия и очистка белков NAF-1 и ферредоксина
кДНК NAF-1 человека, кодирующая цитоплазматическую растворимую (NAF-1) часть белка (остатки 57–135), была амплифицирована с помощью ПЦР и субклонирована в модифицированный вектор pET28-a (+) (Novagen, Madison, WI) как описан [1]. Очистку NAF-1 и мутанта h214C проводили, как описано ранее [1]. Экспрессию и очистку ферредоксина (Fd) как в голо-, так и в апо-формах проводили, как описано ранее [19].
УФ-видимая спектроскопия поглощения, кинетика переноса и распады
Спектры поглощения регистрировали при 350-600 нм (CARY, 300Bio), оборудованном устройством контроля температуры, установленным на 37 ° C. Особое внимание было уделено изменениям оптической плотности при 458 нм (характерный пик поглощения [2Fe-2S] NAF-1) и при 423 нм (характерный для кластера [2Fe-2S] в Fd). % CT переноса кластера (%) в любой момент времени определяли из значений отношения A 423 / A 458 следующим образом: CT (%) = (ΔR / ΔR max ) × 100, где ΔR = R начальный −R начальный и ΔR max = R конечный −R начальный .R obs — наблюдаемое соотношение A 423 / A 458 в данный момент времени, R init — начальное соотношение A 423 / A 458 , наблюдаемое в момент времени 0, которое равно 0,85, и R final представляет собой отношение A 423 / A 458 в длительные периоды времени, когда реакция считается завершенной и равной 1,14. Данные нормализованы и соответствуют единственному экспоненциальному убыванию. Начальные скорости переноса определяли путем определения тангенса угла наклона аппроксимации на ранней стадии процесса переноса (10 мин), когда концентрации NAF-1 и апо-Fd все еще были близки к их начальным количествам.Кинетические измерения проводили с использованием эквимолярных концентраций NAF-1 (WT и h214C) и апо-Fd в присутствии 50 мМ Трис pH 8,0, 100 мМ NaCl, 5 мМ DTT и 5 мМ EDTA, если не указано иное. Апо-Fd и DTT предварительно инкубировали в течение 30 мин до начала эксперимента. Затухания проводились при 37 ° C и определялись путем отслеживания потери пика 458 нм со временем. Затем данные соответствовали единственному экспоненциальному росту. Исследования были выполнены с использованием различных концентраций NAF-1 в 100 мМ Bis-tris и 100 мМ NaCl для pH 7.0.
Перенос кластера в Native-PAGE [2Fe-2S] in vitro, анализ
NAF-1 и мутант h214C инкубировали с апо-Fd. Концентрации NAF-1 и апо-Fd составляли 200 мкМ и 400 мкМ соответственно, чтобы можно было четко визуализировать полосы. NAF-1 и апо-Fd инкубировали при интенсивной аэрации в присутствии 100 мМ DTT или 2% β-меркаптоэтанола и 5 мМ EDTA в течение заданных промежутков времени (0–60 мин). Перенос кластера [2Fe-2S] от NAF-1 к апо-Fd затем анализировали с помощью нативного PAGE [17] и затем окрашивали кумасси, чтобы показать присутствие обоих белков.
Клеточная культура
Клетки h9c2 человека выращивали при 37 ° C в 5% CO. 2 в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM; Biological Industries), с добавлением 1% антибиотиков (пенициллин, стрептомицин и амфотерицин), 1% глутамина и 10% фетального телячья сыворотка.
Измерения флуоресценции
Клетки
H9c2 были засеяны до оптимальной плотности 1-2 миллиона клеток перед планшетом — 3 см перфорированы с прикрепленным микроскопическим предметным стеклом. Клетки метили в течение 15 минут при 37 ° C с помощью 1 мкМ RPA в среде DMEM, содержащей 10 мМ буфера HEPES вместо фенолового красного, и с добавлением 10 мкМ десферриоксамина (DFO) (Sigma-Aldrich) для предотвращения гашения зонда загрязняющими веществами. утюг из среды.После промывания средой DMEM-HEPES и буфером для пермеабилизации (PB-120 мМ KCl, 5 мМ фосфатный буфер, смесь MEM-аминокислот Игла, разбавленная 1-500, 10 мМ HEPES, 1 мкМ CaCl2, 1 мМ MgSO4, pH 7,2), клетки были проницаемы в PB с помощью 25 мкМ дигитонина в течение 30 с. Проницаемые клетки промывали PB и помещали в PB, содержащий 2 мМ сукцината и 1 мкМ DFO, для измерений с помощью флуоресцентной микроскопии с использованием микроскопа Zeiss Axiovert 35 (Carl Zeiss Inc, Северная Америка), присоединенного к системе изображения Polychrome V (Till Photonics, Мюнхен). , Германия).RPA (возбуждение 560 нм — излучение 610 нм) [20], как описано в другом месте [21]. DFO (1 мкМ) присутствовал во всех растворах во время измерений проницаемости и флуоресценции, чтобы предотвратить гашение RPA загрязняющим железом. После записи 4-минутного исходного уровня добавляли 0, 5, 10 или 20 мкМ NAF-1 или 20 мкМ мутант h214C и регистрировали изменения флуоресценции в течение 18 минут при 37 ° C с последующим добавлением 5 мкМ FHQ (Sigma- Олдрич), чтобы добиться максимального тушения. Было получено четыре независимых набора данных, и среднее значение из этих четырех наборов показано на графике зависимости флуоресценции от времени.Последовательность флуоресцентных изображений, полученных с помощью микроскопии, анализировали с помощью программы Image J (Национальные институты здравоохранения).
Результаты
Перенос кластера от NAF-1 к акцепторному белку
Чтобы определить, наделен ли NAF-1 способностью переноса кластеров, как и mitoNEET [17], мы использовали предварительно восстановленный апо-Fd в качестве классического акцепторного белка и NAF-1 аа. 57–135 водорастворимый домен в качестве донора кластера. Профили белков, полученные с помощью нативного PAGE (рис. 2, , верхняя панель ), показали постепенное исчезновение красного NAF-1 и сопутствующее появление красного голо-Fd с течением времени, что указывает на перенос кластера [2Fe-2S] из NAF-1 к апо-Fd без изменений соответствующих уровней белка, как показано окрашиванием кумасси синим.Ход переноса на апо-Fd оценивали спектрофотометрически и отображали на фиг.2 Нижняя панель как% CT переноса кластера (%) от времени инкубации (иллюстративные спектры поглощения апо-Fd, NAF-1 и их взаимодействия приведены на рис. S2). Вклад his114 в кластерную лабильность оценивали путем замены his на cys в NAF-1 в положении 114 (мутант h214C на фиг. 2). Это изменение в связывающем домене кластера по существу стабилизировало кластер [2Fe-2S] и заметно снижало его способность переносить кластер 2Fe-2S.
Верхняя панель . NAF-1 инкубировали при 37 ° C с DTT-восстановленным апо-Fd в течение увеличивающегося времени (0, 3, 7,5, 15 и 30 минут), и продукты обрабатывали на нативном геле. Полосы красного цвета указывают на кластер [2Fe-2S] в двух белках. Диаграммы слева показывают структуру белка [2Fe-2S] NAF-1 (вверху слева) и структуру белка [2Fe-2S] ферредоксина (внизу справа) (обозначенного как holo-Fd с [2Fe- 2S] граница кластера).Замена однокоординирующего His114 в NAF-1 на Cys (h214C) показывает отсутствие переноса на апо-Fd через 60 минут (обозначено как h214C 60 минут). Кроме того, в качестве ссылки использовался holo-Fd (полоса справа). Окрашивание кумасси нативного геля непосредственно под ним показывает аналогичные уровни белка в период экспериментов. Нижняя панель . Процент переноса кластера (CT%) от NAF-1 дикого типа или мутировавшего h214C NAF-1 к апо-Fd определяли по данным спектроскопии поглощения в УФ-видимой области, полученным путем отслеживания реакции переноса в режиме онлайн при 458 нм (голограмма Пик поглощения NAF-1) и при 423 нм (пик поглощения голо-Fd) и расчеты, как описано в экспериментальных процедурах.Данные WT соответствовали экспоненциальному росту, поскольку кинетика проявляла каталитическое поведение. Данные по h214C соответствовали линии, поскольку реакция была очень медленной по сравнению с WT.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0061202.g002
Зависимость переноса кластера от окислительно-восстановительного состояния НАФ-1 и акцептора
Для оценки химических требований NAF-1 для донорства / переноса кластеров мы сначала определили спектрофотометрически, что перенос происходит только тогда, когда NAF-1 был предварительно подвергнут окислительным условиям (рис.3) и апо-Fd в восстанавливающих условиях. Переноса не наблюдалось, когда кластеры NAF-1 восстанавливались предварительной обработкой дитионитом, тогда как воздействие кислорода окружающей среды приводило к окислению кластера и сопутствующему переносу кластера 2Fe-2S (рис. S2). Кинетика переноса (рис. 3) обеспечила расчетную начальную скорость 136 ± 20 M -1 мин -1 , аналогично тому, что было обнаружено с mitoNEET [17] или для других белков ISC [22].
Рис. 3. Переход от NAF-1 происходит только для окисленного состояния кластера в восстановленное состояние апо-Fd.
Верхняя панель . NAF-1, предварительно восстановленный дитионитом, неспособен переносить свой кластер на апо-Fd, как это было проанализировано с помощью абсорбционной спектроскопии в УФ-видимом диапазоне. Окисление кластера при добавлении кислорода способствует переносу кластера.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0061202.g003
Чтобы лучше имитировать клеточные условия, мы подвергли белки более физиологичному восстановителю глутатиону (GSH) [23], который содержится в клетках. ~ 5 мМ и вместе с НАДФН способствует окислительно-восстановительной способности клеток [24].Мы обнаружили, что GSH (но не GSSG) в физиологических концентрациях может активировать апо-акцептор и значительно усиливать перенос с течением времени (рис. 4). Следовательно, перенос кластера действительно жизнеспособен в клеточных условиях.
Рис. 4. Перенос кластера может происходить в присутствии биологического восстановителя глутатиона.
Важно знать, может ли перенос кластера происходить в присутствии биологического восстановителя глутатиона. Поэтому анализы переноса кластера проводили in vitro при 37 ° C в присутствии 5 мМ глутатиона (GSH) в течение определенного периода времени, а затем анализировали с помощью Native PAGE.Fd с его кластером [2Fe-2S] (holo-Fd) был запущен в качестве эталона. Верхний гель не окрашен и показывает перенос кластера [2Fe-2S] видимыми красными полосами на геле. Нижняя панель — тот же гель после окрашивания Кумасси.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0061202.g004
Перенос железа из NAF-1 в интактные митохондрии
Способность NAF-1 к переносу кластера также оценивалась в клетках млекопитающих с использованием митохондрий в качестве потенциального органеллярного акцептора лабильного железа.С этой целью мы использовали клетки, дважды флуоресцентно меченные сенсорами железа [25]: красный родамин B — [(1,10-фенантролин-5-ил)] бензиловый эфир (RPA) для отслеживания лабильного железа в матриксе митохондрий [20], и кальцеин-зеленый (CALG) для отслеживания лабильного железа в цитоплазме [20]. Чтобы сделать митохондрии доступными для NAF-1, мы сначала сделали клетки проницаемыми по протоколу, который сохранил митохондрии нетронутыми и функциональными, поскольку они сохраняли потенциометрический зонд железа RPA, теряя при этом большую часть цитозольного кальцеина [21].Фиг. 5 (, верхняя панель ) изображает изображения флуоресценции, полученные с течением времени после добавления либо NAF-1 (представлены только профили 0 мкМ и 20 мкМ), либо NAF-1, мутировавшего h214C (20 мкМ). Фиг. 5 (, нижняя панель, ) изображает зависящие от времени изменения интенсивности флуоресценции RPA на клетку, анализируемую по флуоресцентным изображениям, как показано на фиг. 5 (верхняя панель). На рис. 5 , верхняя и нижняя панели показывают, что добавление NAF-1 к клеткам, меченным RPA, вызывало зависящее от времени гашение митохондриальной флуоресценции RPA, указывая на лабильный перенос железа от NAF-1 в митохондриальный матрикс, где RPA сильно локализован [ 18], [25].Перенос лабильного железа зависел от концентрации в диапазоне 0–20 мкМ NAF-1 дикого типа, тогда как применение NAF-1, мутировавшего h214C, не приводило к детектируемому переносу кластера в митохондрии даже при самых высоких используемых концентрациях. В данной серии исследований (рис. 5 , верхняя и нижняя панели ) мы использовали мембранопроницаемый комплекс лабильного железа, FeCl 3 -8-гидроксихинолин (FHQ), в качестве экспериментального инструмента для оценки максимально достижимого тушение флуоресценции митохондрий RPA [18].
Рис. 5. Перенос лабильного железа из NAF-1 в митохондрии.
Верхняя панель . Псевдоцветные изображения проницаемых клеток h9c2, меченных красным родамином B — [(1,10-фенантролин-5-ил)] бензиловый эфир (RPA) для обнаружения следов железа в митохондриальном матриксе, а затем измерения флуоресценции каждые две минуты. NAF-1 (WT или мутированный h214C) добавляли до концентраций 0, 5, 10 или 20 мкМ через 4 минуты (показаны только профили 20 мкМ). Псевдоцвет клеток указывает относительные уровни митохондриальной флуоресценции RPA (оранжевый: высокий; синий: низкий).Жирорастворимый пермеант FHQ добавляли до 5 мкМ через 22 мин для достижения максимального гашения. Нижний . График флуоресценции RPA дан в условных единицах (а.е.), полученных путем анализа флуоресценции отдельных клеток с помощью изображения J, как описано в экспериментальных процедурах. Флуоресценция RPA — это среднее значение четырех независимых прогонов.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0061202.g005
Чувствительность кластера NAF-1 и способности переноса железа к антидиабетическим препаратам
Тот факт, что NAF-1 имеет сходные структурные мотивы и биофизические свойства с mitoNEET, который, в свою очередь, демонстрирует чувствительность к антидиабетическому пиоглитазону [2], [13], заставил нас рассматривать NAF-1 как потенциальную мишень для препаратов TZD.Более того, компьютерное моделирование стыковки малых молекул с членами семейства CISD [26], [27] позволило выявить препараты TZD пиоглитазон и розиглитазон, а также натуральный продукт ресвератрол, способствующий долголетию, в качестве потенциально высокоаффинных связывающих партнеров [26]. Эти свойства привели нас к сравнительной оценке эффектов пиоглитазона на NAF-1 по сравнению с mitoNEET с использованием вышеупомянутых анализов. Данные, представленные на рис. 6, по существу резюмируют основные результаты, полученные ранее с помощью mitoNEET [17], в отношении блокирования как спонтанного распада кластера (рис.6A и B) и перенос кластера в митохондрии, меченные RPA (рис. 6C). Добавление пиоглитазона к NAF-1 при pH 7,0, где кластеры [2Fe-2S] являются pH-лабильными, привело к почти 5-кратной стабилизации кластера, поскольку оно увеличивало t 1 / 2 потери кластера с От 1000 ± 160 мин до 4700 ± 350 мин (рис. 6А). Примечательно, что инкубация NAF-1 с антидиабетическим лекарственным средством пиоглитазоном перед добавлением к клеткам, меченным RPA (как показано на фиг.5), аннулировала изменение флуоресценции RPA, вызванное NAF-1 (фиг.6С). Это новое открытие идентифицирует NAF-1, человеческий паралог mitoNEET [17], как возможную вторую митохондриальную мишень для препаратов TZD, проясняя загадку, предложенную недавно [13]. Мы также проверили способность ресвератрола связывать белок NAF-1 и обнаружили, что он увеличивает t 1 / 2 спонтанного разложения с 1000 ± 160 мин. до 6800 ± 500 мин. Достижение 7-кратной кластерной стабилизации аналогично тому, что наблюдалось выше, а также при использовании пиоглитазона TZD на mitoNEET [2].Более того, натуральный продукт ресвератрол также отменял перенос кластера из NAF-1 в митохондрии (фиг. 6C), указывая на то, что также в клетках он действовал на NAF-1 аналогично пиоглитазону TZD. Интересно, что ресвератрол не вызывал заметной стабилизации кластера mitoNEET [2Fe-2S] в диапазоне pH 6,0–7,5 (данные не показаны).
Рис. 6. Влияние пиоглитазона и ресвератрола на NAF-1: кластерная стабилизация и прекращение переноса железа в митохондрии.
Верхняя панель. Кинетику стабильности NAF-1 в отсутствие и в присутствии пиоглитазона контролировали спектрофотометрически (458 нм) при 37 ° C и pH 7,0 (NAF-1 и пиоглитазон по 20 мкМ каждый). Время полураспада поглощения, соответствующего кластеру NAF-1 (2Fe-2S), было увеличено пиоглитазоном с t 1/2 = 1000 ± 160 мин (темные кружки) до t 1/2 = 4700 ± 350 мин (белые кружки). Аналогично, 20 мкМ ресвератрол задерживал разложение кластера NAF-1 с t 1/2 = 6800 ± 500 мин (белые кружки). Нижний . Влияние лекарств на способность NAF-1 переносить лабильное железо в митохондрии, меченные RPA, с использованием проницаемых клеток h9c2. Сбор данных, анализ флуоресцентных изображений и построение графиков были выполнены, как описано в легенде к фиг. 5. Добавление NAF-1 (10 мкМ) к проницаемым клеткам, меченным RPA, через 4 мин приводило к быстрому тушению RPA (красный), тогда как добавление Отсутствие (синий) было устойчивым до добавления проникающего FHQ (5 мкМ) через 22 мин, что привело к максимально достижимому гашению.Добавление NAF-1, предварительно инкубированного с ресвератролом (20 мкМ) (пурпурный) или пиоглитазоном (желтый), отменяет перенос кластера, о чем свидетельствует отсутствие гашения флуоресценции RPA, опять же, до тех пор, пока система не подвергнется воздействию проникающего FHQ.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0061202.g006
Обсуждение
Мы идентифицировали NAF-1, который, как известно, играет роль в ингибировании аутофагии [10] и способствует долголетию [7], [8] и чье клеточное отсутствие приводит к многочисленным патологиям [9] как [2Fe- 2S] белок-переносчик кластера (рис.2). Его способность к переносу кластера возникает только тогда, когда кластер окисляется [2Fe-2S] 2+ , а апоакцептор восстанавливается химическими восстанавливающими агентами или, что более важно, физиологическими агентами, такими как глутатион (рис. 3 и 4). Хотя его основная структура похожа на mitoNEET и обладает некоторыми функциональными и фармакологическими свойствами [1], [2], [17], NAF-1 имеет отчетливую поверхность белка (рис. S1) и отличается своим участием в здоровье. и болезнь. Тем не менее, он разделяет связывание с препаратом против диабета типа II, пиоглитазоном, который первоначально использовался для идентификации mitoNEET как основной клеточной мишени [11].Недавно было высказано предположение, что TZDs действуют также на дополнительный митохондриальный компонент, поскольку связывание все еще происходит при нокауте mitoNEET у животных [13]. В настоящей работе мы обеспечиваем положительную идентификацию NAF-1 как мишени пиоглитазона и важной потенциальной физиологической мишени TZD в митохондриях. Более того, мы показываем, что связывание лекарственного средства TZD отменяет способность передачи кластера от NAF-1 к акцепторным белкам и митохондриям (рис. 6). Это открытие может иметь физиологические и фармакологические последствия для различных расстройств, в которые вовлечен NAF-1 [9].Следуя этому руководству, мы экспериментально подтвердили, что ресвератрол действительно может стабилизировать кластер NAF-1 (но не mitoNEET) [2Fe-2S] и тем самым также препятствовать его переносу в митохондрии (рис. 6). Это открытие подчеркивает важность того, что небольшие молекулы, которые по-разному связываются с mitoNEET или NAF-1, помогут выяснить вероятную многофункциональную роль этих белков в здоровье и болезнях — задачу, которую мы активно преследуем.
Дополнительная информация
Рисунок S1.
Структурное сравнение NAF-1 и mitoNEET. ( A ) Ленточные диаграммы растворимых частей NAF-1 и mitoNEET (аминокислоты 57–135 и 33–108 соответственно), полученные из опубликованных рентгеновских анализов (1,2,1), выделяющих ароматические поверхностные остатки. Различия в составе боковых цепей приводят к различиям в поверхности двух белков, что приводит к избирательному связыванию ресвератрола и других потенциальных малых терапевтических молекул. (B) Аминокислотные последовательности NAF-1 и mitoNEET: буквы зеленого цвета обозначают водорастворимый С-конец, черные буквы обозначают трансмембранный сегмент, а растворимая часть, обращенная к цитоплазме, показана розовым цветом.Символы обозначают уровень сходства между аминокислотами: звездочка — идентичность; толстая кишка, высокое сходство; период, плохое сходство; ни приметы, ни сходства. Синяя линия над последовательностью, соответствующей растворимой части последовательности, указывает элементы вторичной структуры: стрелка для бета-листа и толстая линия для альфа-спирали. Тонкие линии указывают на отсутствие вторичной структуры. (C) Ароматические боковые цепи, наложенные на структуры основной цепи. Обратите внимание, что боковые цепи, отражающие поверхность белка, значительно отличаются.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0061202.s001
(TIF)
Рисунок S2.
NAF-1 передает свой кластер только тогда, когда его [2Fe-2S] кластеры находятся в окисленном состоянии. (A) Apo-Fd предварительно инкубируют с DTT, чтобы гарантировать доступность цистеиновых боковых цепей акцепторного белка для координации кластера. В этих условиях NAF-1 снижается, а перенос кластера ингибируется, о чем свидетельствует отсутствие каких-либо изменений в видимых спектрах NAF-1 с течением времени.Спектр апо-Fd показывает полную потерю кластера (цвет морской волны, <0,05 единиц поглощения). (B) Через 300 мин к раствору добавляется кислород, и перенос кластера происходит легко. Видимые спектры показывают, что NAF-1 быстро окисляется при добавлении кислорода (черный), и кластер со временем превращается в апо-Fd (синий, красный). Видимый след апо-NAF-1 показывает полную потерю кластера (серый цвет, <0,05 единиц поглощения).
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0061202.s002
(TIF)
Вклад авторов
Задумал и спроектировал эксперименты: ST JAZ MLP RM ZIC PAJ RN.Проведены эксперименты: ST JAZ LA ARC DM YH. Проанализированы данные: ST JAZ CHL MLP ZIC PAJ RN. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: ZIC PAJ RN. Написал статью: ST JAZ CHL MLP ZIC PAJ RN.
Список литературы
1.
Conlan AR, Axelrod HL, Cohen AE, Abresch EC, Zuris J, et al .. (2009) Кристаллическая структура Miner1: окислительно-восстановительный белок 2Fe-2S, являющийся причиной синдрома Вольфрама 2. J Mol Biol 392: 143–153.
2.
Paddock ML, Wiley SE, Axelrod HL, Cohen AE, Roy M и др.. (2007) MitoNEET представляет собой уникальный 2Fe 2S белок внешней митохондриальной мембраны, стабилизированный пиоглитазоном. Proc Natl Acad Sci U S A 104: 14342–14347.
3.
Lin J, Zhou T, Ye K, Wang J (2007) Кристаллическая структура mitoNEET человека выявляет отдельные группы белков серы, содержащих железо. Proc Natl Acad Sci U S A 104: 14640–14645.
4.
Hou X, Liu R, Ross S, Smart EJ, Zhu H и др .. (2007) Кристаллографические исследования человеческого MitoNEET. J Biol Chem 282: 33242–33246.
5.
Boucquey M, De Plaen E, Locker M, Poliard A, Mouillet-Richard S и др .. (2006) Noxp20 и Noxp70, два новых маркера ранней нейрональной дифференцировки, обнаруженные в нейроэктодермических клетках-предшественниках тератокарциномы. J Neurochem 99: 657–669.
6.
Chang NC, Nguyen M, Bourdon J, Risse PA, Martin J, et al .. (2012) Связанный с Bcl-2 регулятор аутофагии Naf-1, необходимый для поддержания скелетных мышц. Hum Mol Genet 21: 2277–2287.
7.Chen YF, Kao CH, Chen YT, Wang CH, Wu CY, et al .. (2009) Дефицит Cisd2 вызывает преждевременное старение и вызывает опосредованные митохондриями дефекты у мышей. Гены Дев 23: 1183–1194.
8.
Chen YF, Wu CY, Kirby R, Kao CH, Tsai TF (2010) Роль гена CISD2 в контроле продолжительности жизни и заболеваниях человека. Ann N Y Acad Sci 1201: 58–64.
9.
Amr S, Heisey C, Zhang M, Xia XJ, Shows KH, et al .. (2007) Гомозиготная мутация в новом белке цинкового пальца, ERIS, отвечает за синдром Вольфрама 2.Am J Hum Genet 81: 673–683.
10.
Chang NC, Nguyen M, Germain M, Shore GC (2010) Антагонизм Beclin 1-зависимой аутофагии с помощью BCL-2 в эндоплазматическом ретикулуме требует NAF-1. EMBO J 29: 606–618.
11.
Colca JR, McDonald WG, Waldon DJ, Leone JW, Lull JM и др .. (2004) Идентификация нового митохондриального белка («mitoNEET»), специфически сшитого с помощью тиазолидиндионового фотозонда. Am J Physiol Endocrinol Metab 286: E252–260.
12.Wiley SE, Murphy AN, Ross SA, van der Geer P, Dixon JE (2007) MitoNEET — это железосодержащий белок внешней митохондриальной мембраны, который регулирует окислительную способность. Proc Natl Acad Sci U S A 104: 5318–5323.
13.
Chen Z, Vigueira PA, Chambers KT, Hall AM, Mitra MS, et al .. (2012) Устойчивость к инсулину и метаболические нарушения у тучных мышей улучшаются с помощью нового γ-сберегающего тиазолидиндиона рецептора, активируемого пролифератором пероксисом. J Biol Chem 287: 23537–23548.
14.
Файнштейн Д.Л., Спаньоло А., Акар С., Вайнберг Г., Мерфи П. и др .. (2005) Рецепторно-независимые действия агонистов тиазолидиндиона PPAR: является ли функция митохондрий ключевой? Biochem Pharmacol 70: 177–188.
15.
Gardner OS, Shiau CW, Chen CS, Graves LM (2005) Гамма-независимая активация рецептора, активируемого пролифератором пероксисом, p38 MAPK тиазолидиндионами включает кальций / кальмодулин-зависимую протеинкиназу II и протеинкиназу R: корреляция со стрессом эндоплазматического ретикулума.J Biol Chem 280: 10109–10118.
16.
Hu Y, Liu HB, Simpson RW, Dear AE (2011) PPARgamma-независимое тиазолидиндион-опосредованное ингибирование экспрессии NUR77 в эндотелиальных клетках сосудов. J Endocrinol 208: R1–7.
17.
Zuris JA, Harir Y, Conlan AR, Shvartsman M, Michaeli D, et al .. (2011) Легкий перенос кластеров [2Fe-2S] от мишени для лечения диабета mitoNEET к апо-акцепторному белку. Proc Natl Acad Sci U S A 108: 13047–13052.
18.Шварцман М., Киккери Р., Шанзер А., Кабанчик З. И. (2007) Железо, не связанное с трансферрином, достигает митохондрий по механизму, недоступному для хелатирующих агентов: биологические и клинические последствия. Am J Physiol Cell Physiol 293: C1383–1394.
19.
Fish A, Danieli T, Ohad I, Nechushtai R, Livnah O (2005) Структурная основа термостабильности ферредоксина из Cyanobacterium Mastigocladus ламиносус. Дж. Мол Био 350: 599–608.
20.
Петрат Ф., Вейшейт Д., Ленсен М., де Гроот Х., Сустманн Р. и др.. (2002) Селективное определение митохондриального хелатирующего железа в жизнеспособных клетках с новым флуоресцентным сенсором. Biochem J 362: 137–147.
21.
Glickstein H, El RB, Shvartsman M, Cabantchik ZI (2005) Внутриклеточные лабильные пулы железа как прямые мишени хелаторов железа: флуоресцентное исследование действия хелаторов в живых клетках. Кровь 106: 3242–3250.
22.
Wu G, Mansy SS, Wu SP, Surerus KK, Foster MW, et al .. (2002) Характеристика белка сборки железо-серного кластера (ISU1) из Schizosaccharomyces pombe.Биохимия 41: 5024–5032.
23.
Pompella A, Visvikis A, Paolicchi A, De Tata V, Casini AF (2003) Меняющиеся лица глутатиона, главного героя клетки. Biochem Pharmacol 66: 1499–1503.
24.
Chakravarthi S, Jessop CE, Bulleid NJ (2006) Роль глутатиона в образовании дисульфидной связи и окислительном стрессе, вызванном эндоплазматическим ретикулумом. EMBO Rep 7: 271–275.
25.
Sohn YS, Breuer W, Munnich A, Cabantchik ZI (2008) Перераспределение накопленного клеточного железа: модальность хелатирования с терапевтическими последствиями.Кровь 111: 1690–1699.
26.
Geldenhuys WJ, Funk MO, Awale PS, Lin L, Carroll RT (2011) Новый анализ связывания идентифицирует лиганды с высоким сродством к сайту связывания розиглитазона mitoNEET.
Наф 2: Five Nights at Freddy’s 2 1.07 для Android
Приложение 2 / КонсультантПлюс
к Приказу ГТК России
от 26.10.2000 N 965
СПИСОК
ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ, ВВОЗИМЫХ НА ТАМОЖЕННУЮ
ТЕРРИТОРИЮ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ИЗ СОЮЗНОЙ РЕСПУБЛИКИ
ЮГОСЛАВИИ БЕСПОШЛИННО ИЛИ К КОТОРЫМ ПРИМЕНЯЮТСЯ
СПЕЦИАЛЬНЫЕ (СНИЖЕННЫЕ) СТАВКИ ВВОЗНЫХ
ТАМОЖЕННЫХ ПОШЛИН
Фотодинамическая терапия солидных опухолей in vitro и in vivo с применением комбинации рибофлавина и наноразмерных апконвертирующих фосфоров | Шолина
1. Agostinis P, Berg K, Cengel KA, Foster TH, Girotti AW, Gollnick SO, Hahn SM, Hamblin MR, Juzeniene A, Kessel D, Korbelik M, Moan J, Mroz P, Nowis D, Piette J, Wilson BC, Golab J. Photodynamic therapy of cancer: an update. CA Cancer J Clin. 2011;61(4):250–81. doi: 10.3322/caac.20114.
2. Dysart JS, Patterson MS. Characterization of Photofrin photobleaching for singlet oxygen dose estimation during photodynamic therapy of MLL cells in vitro. Phys Med Biol. 2005;50(11): 2597–616. doi: 10.1088/0031-9155/50/11/011.
3. Allison RR, Sibata CH. Oncologic photodynamic therapy photosensitizers: a clinical review. Photodiagnosis Photodyn Ther. 2010;7(2):61–75. doi: 10.1016/j.pdpdt.2010.02.001.
5. Baier J, Maisch T, Maier M, Engel E, Landthaler M, Bäumler W. Singlet oxygen generation by UVA light exposure of endogenous photosensitizers. Biophys J. 2006;91(4):1452–9. doi: 10.1529/biophysj.106.082388.
6. Yang MY, Chang CJ, Chen LY. Blue light induced reactive oxygen species from flavin mononucleotide and flavin adenine dinucleotide on lethality of HeLa cells. J Photochem Photobiol B. 2017;173:325–32. doi: 10.1016/j.jphotobiol.2017.06.014.
7. Ohara M, Fujikura T, Fujiwara H. Augmentation of the inhibitory effect of blue light on the growth of B16 melanoma cells by riboflavin. Int J Oncol. 2003;22(6):1291–5. doi: 10.3892/ijo.22.6.1291.
8. Pass HI. Photodynamic therapy in oncology: mechanisms and clinical use. J Natl Cancer Inst. 1993;85(6):443–56. doi: 10.1093/jnci/85.6.443.
9. Nadort A, Sreenivasan VK, Song Z, Grebenik EA, Nechaev AV, Semchishen VA, Panchenko VY, Zvyagin AV. Quantitative imaging of single upconversion nanoparticles in biological tissue. PLoS One. 2013;8(5):e63292. doi: 10.1371/journal.pone.0063292.
10. Wang M, Abbineni G, Clevenger A, Mao C, Xu S. Upconversion nanoparticles: synthesis, surface modification and biological applications. Nanomedicine. 2011;7(6):710–29. doi: 10.1016/j.nano.2011.02.013.
11. Generalova AN, Rocheva VV, Nechaev AV, Khochenkov DA, Sholina NV, Semchishen VA, Zubov VP, Koroleva AV, Chichkova BN, Khaydukova EV. PEG-modified upconversion nanoparticles for in vivo optical imaging of tumors. RSC Adv. 2016;(36):30089–97. doi: 10.1039/C5RA25304G.
12. Guller AE, Generalova AN, Petersen EV, Nechaev AV, Trusova IA, Landyshev NN, Nadort A, Grebenik EA, Deyev SM, Shekhter AB, Zvyagin AV. Cytotoxicity and non-specific cellular uptake of bare and surface-modified upconversion nanoparticles in human skin cells. Nano Res. 2015;8(5):1546–62. doi: 10.1007/s12274-014-0641-6.
13. Bareford LM, Avaritt BR, Ghandehari H, Nan A, Swaan PW. Riboflavin-targeted polymer conjugates for breast tumor delivery. Pharm Res. 2013;30(7):1799–812. doi: 10.1007/s11095-013-1024-5.
14. Thomas TP, Choi SK, Li MH, Kotlyar A, Baker JR Jr. Design of riboflavin-presenting PAMAM dendrimers as a new nanoplatform for cancer-targeted delivery. Bioorg Med Chem Lett. 2010;20(17):5191–4. doi: 10.1016/j.bmcl.2010.07.005.
15. Sau A, Sanyal S, Bera K, Sen S, Mitra AK, Pal U, Chakraborty PK, Ganguly S, Satpati B, Das C, Basu S. DNA Damage and apoptosis induction in cancer cells by chemically engineered thiolated riboflavin gold nanoassembly. ACS Appl Mater Interfaces. 2018;10(5):4582–9. doi: 10.1021/acsami.7b18837.
16. Jayapaul J, Arns S, Bunker M, Weiler M, Rutherford S, Comba P, Kiessling F. In vivo evaluation of riboflavin receptor targeted fluorescent USPIO in mice with prostate cancer xenografts. Nano Res. 2016;9(5):1319–33. doi: 10.1007/s12274-016-1028-7.
17. Rao PN, Levine E, Myers MO, Prakash V, Watson J, Stolier A, Kopicko JJ, Kissinger P, Raj SG, Raj MH. Elevation of serum riboflavin carrier protein in breast cancer. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev. 1999;8(11):985–90.
19. Meinhardt M, Krebs R, Anders A, Heinrich U, Tronnier H. Wavelength-dependent penetration depths of ultraviolet radiation in human skin. J Biomed Opt. 2008;13(4):044030. doi: 10.1117/1.2957970.
20. Рочева ВВ, Шолина НВ, Деревяшкин СП, Генералова АН, Нечаев АВ, Хоченков ДА, Семчишен ВА, Хайдуков ЕВ, Степанова ЕВ, Панченко ВЯ. Люминесцентная диагностика опухолей с применением апконвертирующих наночастиц. Альманах клинической медицины. 2016;44(2):227–33. doi: 10.18786/2072-0505-2016-44-2-227-233.
18F-фторид натрия — Препараты
Основные показания к ПЭТ/КТ с
18F-NaFПротивопоказания к ПЭТ/КТ с
18F-NaFГлавные задачи, которые решает ПЭТ/КТ с
18F-NaFРекомендуемые сроки проведения ПЭТ/КТ с
18F-NaF после лечения*Для оценки эффективности любого вида лечения желательно провести исследование до начала терапии.
Подготовка к ПЭТ/КТ с
18F-NaFСпециальной подготовки не требуется. Ограничения в приеме пищи и лекарственных препаратов отсутствуют. Для ускорения выведения радиофармпрепарата из крови пациента рекомендуется за час до исследования употребить 1,0-1,5 литра воды (вода без газа).
Принести с собой
Как проходит ПЭТ/КТ
1. В день исследования к заранее назначенным дате и времени пациент прибывает в корпус «Лучевая диагностика, лучевая терапия» в регистратуру №2 (кабинет №100).
2. В регистратуре пациент оформляет статистический талон и приходит на отделение, расположенное в этом же корпусе, в регистратуру отделения (кабинет №134). Здесь пациент вместе с врачом-диагностом заполняет информированное согласие на исследование, передает врачу медицинские документы о заболевании. Сотрудник отделения измеряет вес и рост пациента (эта информация необходима для расчета дозы радиофармпрепарата (РФП)), а также сообщает код медицинской услуги для оплаты.
3. Оплата исследования производится в кассе, расположенной в холле рядом с регистратурой №2 (кабинет №100).
Уважаемые пациенты! Оплата исследования может занимать от 15 до 40 минут, учитывайте это и постарайтесь не опаздывать на исследование, особенно если Вы записаны на утро.
4. После оплаты, пациент с платежными документами возвращается в регистратуру отделения (кабинет №134) для завершения процедуры оформления.
5. После оплаты и завершения регистрации пациента приглашают в процедурный кабинет для введения РФП. В процедурном кабинете пациенту будет предложено лечь на кушетку, закрыть глаза и полностью расслабиться. Через 10-15 минут полного покоя будет выполнено внутривенное введение РФП. Инъекция РФП переносится легко, болевых или неприятных ощущений ожидать не стоит. Через 5-10 минут после введения РФП пациенту будет выдана бутилированная вода и предложено пройти в комнату для пациентов.
6. Пациент ожидает сканирование в помещении для пациентов (время ожидания составляет в среднем 30-45 минут). Во время ожидания необходимо допить воду и несколько раз сходить в туалет, который находится в этом же помещении.
Внимание! Уважаемые пациенты, напоминаем Вам, что непосредственно после инъекции РФП Вы становитесь источником ионизирующего излучения, а значит, контакт с Вами сопряжен с получением лучевой нагрузки. Учитывая это, в период ожидания сканирования крайне нежелательно выходить за пределы комнаты для пациентов и, тем более, отделения (в холл корпуса, на улицу). По этой же причине в помещении, где Вы ожидаете сканирование, не должны находиться сопровождающие. Предупредите их об этом заранее и предложите подождать Вас за пределами отделения.
7. Из комнаты для пациентов в рассчитанное врачом время пациент приглашается к томографу для сканирования.
Внимание! При сканировании на теле пациента не должны находиться предметы, содержащие металл (цепочки, ремни, украшения и т.д.). Убедительная просьба, снимайте с себя все эти предметы до начала исследования, чтобы не тратить время при укладке в томограф. Во время сканирования необходимо находиться в состоянии полного покоя, дыхание должно быть ровным, спокойным, двигаться нельзя. Важно помнить, что любое движение может повлиять на качество изображения. Время нахождения пациента в томографе зависит от роста пациента и выбранного объема сканирования. Например, сканирование в объеме «от головы до стоп» при росте 165-170 см на аппарате ПЭТ/КТ занимает около 30-45 минут.
8. После сканирования пациент отпускается домой.
Внимание! Уважаемые пациенты, напоминаем Вам, что после исследования рекомендуется воздержаться от контакта с маленькими детьми и беременными женщинами.
Расписание выдачи заключений
Уважаемые пациенты! Обращаем Ваше внимание на то, что результаты исследования, проведенного в плановом порядке, предоставляются не ранее, чем через 24 часа после окончания диагностической процедуры. Просим Вас это учитывать при записи на консультации к другим специалистам!
Обсудить свое заключение с врачом-диагностом возможно только на следующий день после процедуры. Связано это с тем, что после введения РФП Вы становитесь источником ионизирующего излучения, а значит, контакт с Вами является причиной получения медицинским персоналом дополнительной лучевой нагрузки.К началу страницы
Налогоплательщики – организации обязаны сообщать в налоговый орган по месту нахождения организации обо всех обособленных подразделениях российской организации на территории Российской Федерации, через которые прекращается деятельность этой организации (которые закрываются этой организацией) в течение трех дней со дня прекращения деятельности российской организации через иное обособленное подразделение (закрытия иного обособленного подразделения) (пп. 3.1 п. 2 ст. 23 НК РФ).Способы подачи документов
Перейти Непосредственно через инспекцию: Адрес и платежные реквизиты Вашей инспекцииПо почте с уведомлением о вручении
Онлайн с использованием электронной подписи
Наф-2 — tdm11 — LiveJournal
Про принципы планировки частного дома расскажу.Начну не с принципов, а с ошибок.
Ошибка номер 1, поколенческая.
Это интеллигентский шлейф 60-х, утопично предусматривающий культурный отдых вместо непрерывной прополки и копки. Типа сядем с самоваром и будем любоваться окрестностями, а параллельно — читать и/или беседовать. Эту ошибку мы сделали с первой дачей (родители), потом с перестроенной дачей (родители вместе со мной), потом с домом (я вместе с женой). Ну, вы поняли — вот эти террасы и открытые веранды. В нашем случае — лоджия на втором этаже. Можно начать с того, что она просто не нужна, и этим же закончить. Но добавлю, что а) пол лоджии надо хорошо защитить от влаги, б) надо чистить от снега зимой и организовать грамотный водоотвод и б) хорошо утеплить, поскольку под лоджией — жилые помещения. В результате вы получаете… Ничего не получаете, кроме вопросов «Какую же ограду сделать, чтобы она смотрелась не дико?» и большой проблемы «На что опереть крышу?» Плюс тоска по глупо утраченным кв.метрам.
Ошибка номер 2, преклоненческая.
Американское кино. Ну, вы поняли — отсутствие «настоящей» прихожей, холодных сеней. Нет, прихожая предусмотрена, она же как бы холл, места вроде хватает. Не буду продолжать, это просто отсутствие опыта, которым — нынешним накопленным — я теперь и делюсь.
Больше ошибок за 30 лет не выявлено.
Теперь начальные условия:
1. Два этажа (плюс подвал)
2. Простая двухскатная крыша
3. Без пристроек (параллелепипед)
4. Окна только на дорогу и на задний двор, в стороны — минимум. Одно окно на комнату, никаких «светлых» комнат.
5. Гараж — в периметре дома.
Важные условия, которые обсуждались на берегу:
6. Один единственный вход (плюс ворота гаража). Вход с парадной стороны, никаких выходов «на двор». Мы не против второго «рабочего» выхода, но с ним нормальную планировку просто не получить. Со вторым входом вы получаете в нагрузку коридор, ещё одну прихожую и крыльцо. Это огромные метры, товарищи, и… избегайте коридоров, короче. Это всегда некрасиво и неудобно, это от придуманной безысходности.
7. Создание «коммуникационного колодца»: сведение мокрых зон, разводки воды и отопления, канализации, вентиляции в единую вертикальную структуру. Обычно так само получается, поскольку многое привязано к дымовой трубе, но сколько я насмотрелся в старых домах этих горизонтальных трубопроводов, которые тянутся чуть ли не к противоположному углу дома (я не про отопление, конечно).
8. «Посадить» крышу пониже, из чисто эстетических соображений. Простой двухэтажный дом под простой крышей выглядит утилитарным бараком. Мы решили сделать фактически мансарду, но под «неломанной крышей», переведя жилой метраж под низкой частью крыши в помещения типа «чулан».
9. Окна делать только в длинной стене комнаты. Это очевидное решение, когда есть выбор, в отличие от многоквартирных домов. Не забывайте о такой возможности — это фишка «своего» дома.
10. Сделать арку в большую комнату.
Получился такой проект:
Первый этаж:
Оранжевым нарисованы два позже отгороженных объёма: раздевалка-теплушка для рабочей одежды (примыкает к стене санузла, дверь в реале сдвинута вверх по отношению к обозначенной на чертеже) и холодная прихожая на месте бывшего пустого крыльца.
Коричневый прямоугольник — гардероб длиной 2 м и высотой под потолок. Он очень важен для зонирования дома. За его спиной находятся:
а) лестница в подвал;
б) лестница на второй этаж; все лестницы стальные — это важно. На этой лестнице за спиной шкафа — тонкая декоративная перегородка, аналогичная видимой на фото.
в) вход в гараж. За дверью — площадка перед дверью в гараж и спуск в подвал.
Второй этаж:
По бокам — «съеденные» мансардой боковые объёмы — чуланы. Желтым — отгороженная позже часть лоджии. В верхнем холле — книги, он не пустой.
=====
Не очень понятно, зачем семье из четырёх человек четыре спальни. Тем более, что дети были уже близко к окончанию школы. Ну что сказать… — решение всё равно оказалось верным. Последние свои годы с нами жила тёща, как раз на первом этаже. Детишки с семьями приезжают минимум на два месяца, ну и в течение года иногда. Да и два оборудованных рабочих места нынче необходимы.
Об основных направлениях деятельности субъектов бюджетного планирования муниципального образования Пуровский район с использованием программно — целевых методов бюджетного планирования и мерах по повышению результативности бюджетных расходов от 30.12.2011
МУНИЦИПАЛЬНОЕ ОБРАЗОВАНИЕ ПУРОВСКИЙ РАЙОН
ГЛАВА РАЙОНА
П О С Т А Н О В Л Е Н И Е
30 декабря 2011 г. № 617-ПГ
г. Тарко-Сале
Об основных направлениях деятельности субъектов бюджетного планирования муниципального образования Пуровский район с использованием программно-целевых методов бюджетного планирования и мерах по повышению результативности
бюджетных расходов
В целях реализации постановления Правительства Российской Федерации от 22 мая 2004 года № 249 «О мерах по повышению результативности бюджетных расходов», постановления Администрации Ямало-Ненецкого автономного округа от 31 июля 2008 года № 405-А «Об основных направлениях деятельности субъектов бюджетного планирования Ямало-Ненецкого автономного округа с использованием программно-целевых методов бюджетного планирования и мерах по повышению результативности бюджетных расходов», внедрения методов программно-целевого бюджетного планирования, ориентированного на результат, при формировании расходов бюджета муниципального образования Пуровский район
ПОСТАНОВЛЯЮ:
1. Утвердить:
1.1. Положение о докладах о результатах и основных направлениях деятельности субъектов бюджетного планирования муниципального образования Пуровский район, согласно приложению № 1 к настоящему постановлению.
1.2. Методические рекомендации по подготовке докладов о результатах и основных направлениях деятельности субъектов бюджетного планирования муниципального образования Пуровский район, согласно приложению № 2 к настоящему постановлению.
1.3. Перечень участников процесса перевода на программно-целевой метод бюджетного планирования, ориентированный на результат, согласно приложению № 3 к настоящему постановлению.
1.4. Методические рекомендации по подготовке Сводного доклада о результатах и основных направлениях деятельности субъектов бюджетного планирования муниципального образования Пуровский район, согласно приложению № 4 к настоящему постановлению.
2. Субъектам бюджетного планирования муниципального образования Пуровский район при подготовке докладов о результатах и основных направлениях деятельности применять Методические рекомендации по подготовке докладов о результатах и основных направлениях деятельности субъектов бюджетного планирования муниципального образования Пуровский район и прилагаемые к ним формы.
3. Управлению информационно-аналитических исследований и связей с общественностью Администрации Пуровского района (Е.В. Кузнецов) разместить настоящее постановление на официальном сайте муниципального образования Пуровский район.
4. Опубликовать настоящее постановление в Пуровской районной муниципальной общественно-политической газете «Северный луч».
5. Контроль исполнения настоящего постановления возложить на заместителя Главы Администрации района по вопросам экономики Т.Я. Хоптяр.
И.п. Главы района Н.А.Фамбулова
Приложения к документу:
Влияние нафталина на фотохимическую активность фотосистемы 2
БИОХИМИЯ, 2014, том 79, вып. 11, с. 1493–1504
УДК 577.355.3
© 2014 А.В. Ланкин, В.Д. Креславский, А.Ю. Худякова, С.К. Жармухамедов, С.И. Аллахвердиев
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: нафталин, фотосистема 2, переменная и замедленная флуоресценция хлорофилла, отделенные листья гороха, тилакоидные мембраны, фотосинтетические пигменты.
Аннотация
Изучали действие одного из типичных полициклических ароматических углеводородов, нафталина (Наф), на фотосинтетическую активность фотосистемы 2 (ФС-2) в препаратах тилакоидных мембран и листьях двадцатидневных растений гороха. Образцы инкубировали в воде в присутствии Наф (0,078, 0,21 и 0,78 мМ) при освещении белым светом (15 мкмоль квантов м–2 с–1) в течение 0,2–24 ч. Активность ФС-2 определяли с помощью методов быстрой и замедленной флуоресценции хлорофилла a. Инкубация образцов в водных растворах Наф при концентрациях 0,21 и 0,78 мМ приводила к понижению максимальной квантовой эффективности (Fv/Fm) ФС-2, значительным изменениям в полифазной кинетике индукции флуоресценции (OJIP) и уменьшению амплитуд быстрой и медленных компонент замедленной флуоресценции хлорофилла a. Увеличивалась также скорость выхода электролитов из листьев, предварительно инкубированных в растворе Наф (0,21 мМ). Заметное снижение упомянутых флуоресцентных параметров в препаратах тилакоидных мембран наблюдали уже при концентрации Наф 0,03 мМ и 12-минутном выдерживании образцов. Содержание Хл a и b, а также каротиноидов (мг на 1 г сырого веса) изменялось незначительно. Обнаружено, что квантовые выходы переноса электрона от QA к QB (ϕET2o), а также вплоть до акцепторов фотосистемы 1 (ϕRE1o) снижаются. Эти результаты объясняются увеличением количества QВ-невосстанавливающих центров ФС-2, которое возрастало при увеличении концентрации Наф и времени экспозиции. Действие Наф, снижающее активность ФС-2, частично снималось в присутствии донора электрона, аскорбата натрия. На основе полученных данных предполагается, что Наф нарушает интактность клеточных мембран и действует, в основном, на акцепторную и, в меньшей степени, на донорную сторону ФС-2.
ASTM Тендер — оферент: NAF 2 S.p.A.
ВНИМАТЕЛЬНО ПРОЧИТАЙТЕ СЛЕДУЮЩИЕ ОГРАНИЧЕНИЯ И УСЛОВИЯ, КАСАЮЩИЕСЯ ДОСТУПА К ДАННОМУ РАЗДЕЛУ ВЕБ-САЙТА
Ниже приводится важная информация в отношении общего добровольного тендерного предложения ( offerta pubblica di acquisto volontaria totalitaria ) (« Offer ») для обыкновенных акций (« акций ») ASTM SpA (« Эмитент »). что NAF 2 S.П.А. объявлено с уведомлением, опубликованным в соответствии с пунктом 1 статьи 102 Законодательного декрета 58/1998 20 февраля 2021 года.
Предложение запускается в Италии, поскольку Акции котируются на Mercato Telematico Azionario , организованном и управляемом Borsa Italiana S.p.A., и, за исключением случаев, указанных ниже, подлежат обязательствам по раскрытию информации и процедурным требованиям, предусмотренным итальянским законодательством.
Предложение будет запущено путем публикации документа предложения, подлежащего утверждению Национальным комиссаром по обществу и борсе (CONSOB) («Документ предложения »).Документ предложения будет содержать полное описание условий предложения, включая условия принятия.
В той степени, в которой это применимо, Предложение также проводится в Соединенных Штатах в соответствии с применимыми положениями Раздела 14 (e) Закона США о фондовых биржах 1934 года («Закон о биржах ») и Положения 14E, принятого в соответствии с Законом о биржах. , без ущерба для применимых исключений, предусмотренных Правилом 14d-1 Закона о биржах (« Трансграничные исключения »).
Документ предложения, переведенный на английский язык, будет доступен держателям Акций, проживающим в США. Английская версия документа с предложением будет просто любезным переводом, а итальянская версия документа с предложением будет единственным документом, представленным в CONSOB для утверждения.
Предложение не проводилось и не будет проводиться или распространяться в Канаде, Японии и Австралии, а также в любой другой стране, в которой такое Предложение не разрешено без разрешения компетентных органов или других обязательств со стороны Претендента ( вместе « Другие страны »).
Принятие предложения сторонами, проживающими в других странах, может быть связано с определенными обязательствами или ограничениями, предусмотренными законом или нормативными положениями. Стороны, желающие принять участие в Предложении, несут исключительную ответственность за соблюдение этих законов, и, следовательно, перед принятием предложения эти стороны должны проверить наличие и применение любых таких обязательств или ограничений, и им настоятельно рекомендуется проконсультироваться со своими собственные советники.
Любой, кто намеревается получить доступ к этому разделу веб-сайта и просмотреть Документ предложения и другие документы, опубликованные в нем, должен внимательно прочитать и полностью осознавать содержащуюся в нем информацию.
Эта информация, включенная в этот раздел веб-сайта, не представляет собой предложение о покупке или ходатайство о предложении покупки акций Эмитента. В начале Срока предложения, в соответствии с действующим законодательством, Оферент опубликует Документ предложения, который акционеры Эмитента должны внимательно изучить.
Нажимая кнопку «Я ПРИНИМАЮ», вы заявляете и гарантируете, что физически не находитесь и не проживаете в других странах, и что вы прочитали, поняли, полностью принимаете и соглашаетесь соблюдать все вышеуказанные ограничения.
ПРИНЯТЬ ОТКАЗАТЬ
NaF ПЭТ / КТ для оценки ответа на метастазы рака простаты в кости, подвергнутые однофракционной стереотаксической абляционной лучевой терапии тела | Радиационная онкология
Келли С.П., Андерсон В.Ф., Розенберг П.С., Кук МБ. Прошлая, текущая и будущая заболеваемость и бремя метастатического рака простаты в Соединенных Штатах. Eur Urol Focus. 2018; 4 (1): 121–7. https://doi.org/10.1016/j.euf.2017.10.014.
Артикул PubMed Google Scholar
Mazzone E, Preisser F, Nazzani S и др. Расположение метастазов у современных больных раком простаты влияет на смертность от рака. Clin Genitourin Cancer. 2018; 16 (5): 376–384.e1. https://doi.org/10.1016/j.clgc.2018.05.016.
Артикул PubMed Google Scholar
Muldermans JL, Romak LB, Kwon ED, Park SS, Olivier KR. Стереотаксическая лучевая терапия тела при олигометастатическом раке простаты. Int J Radiat Oncol Biol Phys.2016; 95 (2): 696–702. https://doi.org/10.1016/j.ijrobp.2016.01.032.
Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar
Сутера П., Кламп Д.А., Калаш Р. и др. Первые результаты многоцентрового исследования фазы 2 стереотаксической абляционной лучевой терапии при олигометастатическом раке. Int J Radiat Oncol. 2019; 103 (1): 116–22. https://doi.org/10.1016/j.ijrobp.2018.08.027.
Артикул Google Scholar
Бриджит Кунц Б.Ф., редактор А. Стереотаксическая лучевая терапия для тела при олигометастатическом раке простаты: охота за серебряной пулей. DOI: https: //doi.org/10.1016/j.ijrobp.2017.05.020.
Ягару А., Миттра Е., Дик Д.В., Гамбхир СС. Проспективная оценка сцинтиграфии 99mTc MDP, 18F NaF ПЭТ / КТ и 18F FDG ПЭТ / КТ для выявления метастазов в скелете. Mol Imaging Biol. 2012. 14 (2): 252–9. https://doi.org/10.1007/s11307-011-0486-2.
Артикул PubMed PubMed Central Google Scholar
Джамбор I, Куисма А., Рамадан С. и др. Проспективная оценка сцинтиграфии планарной кости, ОФЭКТ, ОФЭКТ / КТ, ПЭТ / КТ 18F-NaF и МРТ всего тела 1,5 Тл, включая DWI, для обнаружения метастазов в кости у пациентов с раком груди и простаты высокого риска: клиническое испытание SKELETA. Акта Онкол (Мадр). 2016; 55 (1): 59–67. https://doi.org/10.3109/0284186X.2015.1027411.
Артикул Google Scholar
Миёси Ю., Уэмура К., Кавахара Т. и др.Прогностическое значение индекса автоматического сканирования костей у мужчин с метастатическим устойчивым к кастрации раком простаты, получавшим энзалутамид или абиратерона ацетат. Clin Genitourin Cancer. 2017; 15 (4): 472–8. https://doi.org/10.1016/j.clgc.2016.12.020.
Артикул PubMed Google Scholar
Wakabayashi H, Nakajima K, Mizokami A, et al. Сцинтиграфия костей как новый биомаркер визуализации: взаимосвязь между индексом сканирования костей и маркерами метаболизма костей у пациентов с раком простаты с метастазами в кости.Ann Nucl Med. 2013; 27 (9): 802–7. https://doi.org/10.1007/s12149-013-0749-x.
CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar
Even-Sapir E, Metser U, Mishani E, Lievshitz G, Lerman H, Leibovitch I. Выявление костных метастазов у пациентов с раком простаты высокого риска: планарная сцинтиграфия кости 99mTc-MDP, одно- и мульти-поле зрения SPECT, 18F-фторидный ПЭТ и 18F-фторидный ПЭТ / КТ. J Nucl Med.2006; 47 (2): 287–97 DOI: 47/2/287.
PubMed PubMed Central Google Scholar
Schirrmeister H, Glatting G, Hetzel J, et al. Проспективная оценка клинической ценности сканирования плоских костей, ОФЭКТ и (18) F-меченого NaF ПЭТ при впервые выявленном раке легкого. J Nucl Med. 2001; 42 (12): 1800–4 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11752076. По состоянию на 21 августа 2018 г.
CAS PubMed Google Scholar
Блау М., Ганатра Р., Бендер Массачусетс. 18 F-фторид для визуализации костей. Semin Nucl Med. 1972; 2 (1): 31–7 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/5059349. По состоянию на 6 декабря 2018 г.
CAS Статья Google Scholar
Grant FD, Fahey FH, Packard AB, Davis RT, Alavi A, Treves ST. Скелетный ПЭТ с 18F-фторидом: применение новой технологии к старому индикатору. J Nucl Med. 2007. 49 (1): 68–78. https://doi.org/10.2967/jnumed.106.037200.
Артикул PubMed Google Scholar
Even-Sapir E, Metser U, Flusser G, et al. Оценка злокачественного заболевания скелета: первоначальный опыт с 18F-фторидным ПЭТ / КТ и сравнение 18F-фторидного ПЭТ и 18F-фторидного ПЭТ / КТ. J Nucl Med. 2004. 45 (2): 272–8.
PubMed Google Scholar
Hicks RJ, Hofman MS. Сохранится ли роль ОФЭКТ-КТ в онкологии в эпоху ПЭТ-КТ? Нат Рев Клин Онкол. 2012; 9 (12): 712–20. https://doi.org/10.1038/nrclinonc.2012.188.
CAS Статья PubMed Google Scholar
Арвола С., Джамбор И., Куисма А. и др. Сравнение стандартизованных значений поглощения 99m Tc-HDP ОФЭКТ / КТ и 18 F-NaF ПЭТ / КТ при метастазах в кости рака груди и простаты. Eur J Nucl Med Mol Imaging Res. 2019; 9 (1). https://doi.org/10.1186/s13550-019-0475-z.
Siva S, Bressel M, Murphy DG, et al. Стереотаксическая абативная лучевая терапия тела (SABR) при олигометастатическом раке простаты: проспективное клиническое испытание.Eur Urol. 2018; 0: 0. https://doi.org/10.1016/j.eururo.2018.06.004.
Артикул Google Scholar
Cox BW, Spratt DE, Lovelock M, et al. Консенсусное руководство международного консорциума по радиохирургии позвоночника по определению целевого объема в стереотаксической радиохирургии позвоночника. Int J Radiat Oncol. 2012; 83 (5): e597–605. https://doi.org/10.1016/j.ijrobp.2012.03.009.
Артикул Google Scholar
Cysouw M, Bouman-Wammes E, Hoekstra O, et al. Прогностическая ценность [18 F] -фторметилхолина позитронно-эмиссионной томографии / компьютерной томографии перед стереотаксической лучевой терапией тела при олигометастатической радиационной онкологии рака простаты. Int J Radiat Oncol Biol Phys. 2018; 101 (2): 406–10. https://doi.org/10.1016/j.ijrobp.2018.02.005.
Артикул PubMed Google Scholar
Хан С, Ву С, Ким Й.Дж., Сух Ч.Влияние ПЭТ с 68 Ga-PSMA на лечение пациентов с раком простаты: систематический обзор и метаанализ. Eur Urol. 2018; 74 (2): 179–90. https://doi.org/10.1016/j.eururo.2018.03.030.
CAS Статья PubMed Google Scholar
Zacho HD, Nielsen JB, Afshar-Oromieh A, et al. Проспективное сравнение ПЭТ / КТ с 68Ga-PSMA, ПЭТ / КТ с 18F-фторидом натрия и диффузионно-взвешенной МРТ для выявления метастазов в кости при биохимически рецидивирующем раке простаты.Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2018; 45 (11): 1884–97. https://doi.org/10.1007/s00259-018-4058-4.
CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar
Упримный Ц, Свириденка А, Фриц Дж. И др. Сравнение ПЭТ / КТ [68Ga] Ga-PSMA-11 с ПЭТ / КТ [18F] NaF в оценке метастазов в кости у пациентов с метастатическим раком простаты до радионуклидной терапии. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 2018; 45 (11): 1873–83. https: // doi.org / 10.1007 / s00259-018-4048-6.
CAS Статья PubMed PubMed Central Google Scholar
Шива С., Каллахан Дж., Прайор Д., Мартин Дж., Лоурентчук Н., Хофман М.С. Применение позитронно-эмиссионной томографии 68 Ga для специфического мембранного антигена простаты в диагностике и оценке ответа на рецидив почечно-клеточного рака. J Med Imaging Radiat Oncol. 2017; 61 (3): 372–8. https://doi.org/10.1111/1754-9485.12590.
Артикул PubMed Google Scholar
О вакансиях в NAF
Что такое Занятость NAF?
Работа в NAF считается занятостью на федеральном уровне. Однако он отличается от занятость на федеральной государственной службе, поскольку деньги использовались для выплаты заработной платы Сотрудники NAF происходят из другого источника.Должности государственной службы оплачиваются за счет денег, ассигнованных Конгрессом. Деньги NAF, с другой стороны, генерируются самостоятельно. клубами ВВС, боулинг-центрами, полями для гольфа и другими мероприятиями, в которых используются Сотрудники NAF.
У нас есть два типа позиций NAF: «гибкие» и «обычные».«Гибкие сотрудники иметь графики работы, которые зависят от потребностей деятельности. Эти сотрудники могут работать от нуля до 40 часов в неделю и не получать преимущества. Обычные сотрудники работают от 20 до 40 часов в неделю в зависимости от должности. требования, и имеют право на получение пособий.
Объем деятельности отдела кадров
Обслуживает более 25000 позиций NAF на объектах ВВС США по всему миру
Льготы
Сотрудники с регулярными назначениями имеют право на следующие льготы и компенсация: страхование здоровья и жизни, премии, пенсионный план, 401 (k), годовой отпуск, больничный, военный, административный отпуск, декретный отпуск, отцовство отпуск и судебный отпуск, сверхурочные, отпускные, воскресные взносы, разница между сменами, компенсация работникам и компенсация по безработице.
Сотрудники с гибкими назначениями имеют право на следующие льготы и Компенсация: оплата сверхурочной работы, разница между сменами, премии, компенсация работникам и компенсация по безработице.
Другие преимущества: как правило, все программы обслуживания (кроме столовых) могут использоваться лицами, которые участвуют в миссии ВВС.Перечислены некоторые программ, которые могут быть доступны вам как сотруднику.
Мероприятия и программы
NAF HRO — Неллис Лайф
Все сотрудники ВВС ВВС США должны пройти следующие тренинги по общей осведомленности (TFAT) и технике безопасности в течение 60 дней с момента первоначального трудоустройства.
— AF Ориентация на нового сотрудника (AF NEO) — единовременное требование при первоначальном приеме на работу.
— Борьба с торговлей людьми (CTIP) — единовременное требование при приеме на работу до дальнейшего уведомления.
— Закон об уведомлениях и федеральных служащих о борьбе с дискриминацией и преследовании (NoFEAR) — один раз при приеме на работу, затем каждые 24 месяца.
— Свобода вероисповедания — один раз при приеме на работу, затем каждые 36 месяцев.
— Безопасность операций (OPSEC) — один раз при приеме на работу, затем каждые 12 месяцев.
— Force Protection — один раз при приеме на работу, затем каждые 12 месяцев.
— Курс по основам управления рисками в ВВС — после первого приема на работу до дальнейшего уведомления.
— Система экологического менеджмента — Общая осведомленность — После первого приема на работу до дальнейшего уведомления.
-Cyber Awareness (только для сотрудников с доступом к правительственному компьютеру) — один раз при приеме на работу, затем каждые 12 месяцев.
Это обучение доступно на веб-сайте ADLS по адресу https: // golearn.adls.af.mil/login.aspx.
У вас должна быть карта общего доступа (CAC), чтобы получить полный доступ к сайту.
Все курсы подготовки военно-воздушных сил (AFSVT), а ранее курсы FSKC, теперь необходимо регистрировать и проходить через веб-сайт GeniusSIS. См. Инструкции по настройке учетной записи Genius, чтобы узнать, как настроить учетную запись. Genius Account Setup Learner (прикрепить PDF)
https://afservices.geniussis.com/PublicWelcome.aspx
ПРИМЕЧАНИЕ. Все курсы AFSVT должны быть зарегистрированы с использованием регистрационной формы на веб-сайте GeniusSIS, одобрены и направлены вашим менеджером производственного объекта и / или шефом полетов, а также вашим менеджером по обучению.
Для получения дополнительной подготовки по вопросам карьеры / профессионального развития посетите веб-сайт Air Force Portal по адресу www.my.af.mil . С этого сайта вы также можете получить доступ к другим сайтам обучения, таким как;
Virtual Force Development Center (vFDC), AF e-Learning и myPers!
За дополнительной информацией обращайтесь к специалисту по обучению NAF по телефону [email protected]
NAF Отдел кадров
Общие
Что такое трудоустройство NAF?
ЗанятостьNAF считается занятостью на федеральном уровне.Однако это отличается от найма на федеральную государственную службу, потому что деньги, используемые для выплаты заработной платы служащим NAF, поступают из другого источника. Должности государственной службы оплачиваются деньгами, ассигнованными Конгрессом. Деньги NAF, с другой стороны, генерируются клубами ВВС, боулинг-центрами, полями для гольфа и другими видами деятельности, в которых используются сотрудники NAF.
У нас есть два типа позиций NAF: «гибкие» и «обычные». У гибких сотрудников есть графики работы, которые зависят от потребностей деятельности.Эти сотрудники могут работать от нуля до 40 часов в неделю и не получают пособий. Обычные сотрудники работают от 20 до 40 часов в неделю в зависимости от требований к должности и имеют право на получение пособий.
Преимущества
Сотрудники, имеющие регулярные назначения, имеют право на следующие льготы и компенсации:
Сотрудники с гибкими контрактами имеют право на следующие льготы и компенсации:
Другие льготы: Как правило, все программы обслуживания могут использоваться лицами, которые участвуют в миссии ВВС. Ниже перечислены некоторые программы, которые могут быть доступны вам как сотруднику.
Деятельность включает:
Выездное обследование NAF
Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie
Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.
Настройка вашего браузера для приема файлов cookie
Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:
Почему этому сайту требуются файлы cookie?
Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.
Что сохраняется в файле cookie?
Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.
Как правило, в cookie-файлах может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.
Биохимические свойства новой клеточной мишени для антидиабетических препаратов
Abstract
Фактор аутофагии лишения питательных веществ-1 (NAF-1) (синонимы: Cisd2, Eris, Miner1 и Noxp70) представляет собой кластерный белок [2Fe-2S], иммунно обнаруживаемый как в эндоплазматическом ретикулуме (ER), так и во внешних митохондриях. мембрана.Он был вовлечен в патологию человека (синдром Вольфрама 2) и в опосредованную BCL-2 антагонизацию зависимой от Beclin 1 аутофагии и угнетение запасов кальция в ER. Чтобы получить представление о функциях NAF-1, мы исследовали биохимические свойства его кластера 2Fe-2S и чувствительность этих свойств к небольшим молекулам. Структура растворимого домена NAF-1 показывает, что он образует гомодимер с каждым протомером, содержащим кластер [2Fe-2S], связанный 3 Cys и одним His. NAF-1 продемонстрировал необычную способность переносить свой кластер 2Fe-2S на апо-акцепторный белок (за которым следует in vitro по спектрофотометрии и с помощью нативного электрофореза PAGE) и переносить железо в интактные митохондрии в клеточных моделях (отслеживается с помощью флуоресцентной визуализации. с флуоресцентными сенсорами железа, нацеленными на митохондрии).Важно отметить, что препарат пиоглитазон отменяет способность NAF-1 переносить кластер на акцепторные белки и железо в митохондрии. Аналогичные эффекты были обнаружены у антиоксиданта ресвератрола, способствующего борьбе с диабетом и способствующего долголетию. Эти результаты показывают, что NAF-1 является ранее не идентифицированной клеточной мишенью противодиабетических тиазолидиндионовых препаратов, таких как пиоглитазон и природного продукта ресвератрола, оба из которых взаимодействуют с белком и стабилизируют его лабильный кластер [2Fe-2S].
Образец цитирования: Tamir S, Zuris JA, Agranat L, Lipper CH, Conlan AR, Michaeli D, et al.(2013) Фактор аутофагии лишения питательных веществ-1 (NAF-1): биохимические свойства новой клеточной мишени для антидиабетических препаратов. PLoS ONE 8 (5): e61202. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0061202
Редактор: Яаков Коби Леви, Институт науки Вейцмана, Израиль
Поступила: 11 декабря 2012 г .; Дата принятия: 7 марта 2013 г .; Опубликовано: 22 мая 2013 г.
Авторские права: © 2013 Tamir et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.
Финансирование: Эта работа была поддержана следующими средствами: грант Израильского научного фонда (ISF) ISF 863/09 предоставлен RN; ISF 141/06 и грант от канадских друзей Еврейского университета, присужденный ZIC; ISF 214/08 и грант Европейского Союза FP7 — Мария Кюри 447, предоставленные RM; грант 2T32GM007240-29 на обучение клеточной и молекулярной генетике (CMG), предоставленный ARC; Национальные институты здравоохранения (NIH) GM54038 и NIH GM101467 в PAJ; и грант 5T32DK007233-34 по обучению гемам и белкам крови компании JAZ.Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.
Конкурирующие интересы: Авторы заявили, что конкурирующих интересов не существует.
Введение
NAF-1 (фактор аутофагии-1, лишающий питательных веществ, синонимы: ERIS, Miner1) является членом недавно открытого семейства белков железо-сера (FeS), кодируемых генами Cisd , которые определяются уникальным Аминокислотная последовательность CDGSH в их домене связывания кластера FeS [1] — [4].Интерес к NAF-1 в последнее время возрос, потому что этот ген находится в области хромосомы, связанной с развитием нейронов [5], и теперь известно, что он имеет решающее значение для поддержания скелетных мышц [6] и для обеспечения долголетия [7], [8]. Более того, ошибка транскрипционного сплайсинга приводит к редкому, но серьезному заболеванию, называемому синдромом Вольфрама 2 [9], которое связано с нарушениями слуха, тяжелой слепотой, диабетом и более низкой продолжительностью жизни. Белок, который локализован как в ER [9], так и в митохондриях [7], функционально вовлечен в аутофагию клетки, возможно, как медиатор антагонизма Bcl-2 зависимой от Beclin-1 аутофагии на поверхности ER [10 ].
Кристаллическая структура NAF-1 [1] показала, что это гомодимерный белок [2Fe-2S], и каждый протомер содержит один кластер 2Fe-2S, связанный с белком обычной координационной геометрией 3-Cys-1-His (рис. . 1). Структура несет подобную складку основы [1] его паралогу mitoNEET (Fig. S1) [2], ранее идентифицированной мишени тиазолидиндионового (TZD) класса противодиабетических препаратов [11], [12]. Недавняя работа предположила, что существует дополнительная митохондриальная мишень для этого класса лекарств [13], поэтому мы попытались определить, был ли NAF-1 истинной мишенью для TZD.Важно отметить, что эти результаты имеют отношение к разработке альтернативных методов лечения диабета типа II, поскольку до сих пор фармакологические (как положительные, так и вредные) эффекты препаратов TZD были широко связаны с рецептором гамма-PPARγ, активируемым пролифератором пероксисом [11] — [16].
Рисунок 1. Структура НАФ-1.
( A ) Ленточные диаграммы растворимых частей NAF-1 (аминокислоты 57–135), полученные из опубликованных рентгеновских анализов (1) (код PDB 3FNV). Белок гомодимерный и состоит из двух основных доменов — бета-кэпа и кластерного связывающего домена, где каждый протомер содержит кластер [2Fe-2S] (сера и железо изображены желтыми и оранжевыми сферами соответственно).( B ) Увеличение одного из сайтов связывания кластера NAF-1 с выделением единственного координирующего остатка His и трех координирующих остатков Cys.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0061202.g001
Поскольку мы недавно определили функциональную роль mitoNEET как белка-переносчика кластера, перенос железа которого в митохондрии отменяется препаратами TZD [17], мы исследовали способность передачи кластера НАФ-1. Было обнаружено, что передача от NAF-1 к апо-акцепторам происходит только тогда, когда кластеры [2Fe-2S] были окислены (состояние [2Fe-2S] 2+ ) и свободные цистеины акцепторного белка были восстановлены (свободная тиоловая форма ).Добавление глутатиона (GSH), физиологического восстановителя, было эффективным при подготовке апо-акцепторного белка для переноса кластера. Добавление NAF-1 к клеткам приводит к накоплению железа в митохондриях. Препарат пиоглитазон против диабета типа II стабилизировал высвобождение кластеров NAF-1 [2Fe-2S] и предотвращал перегрузку железом в митохондриях. Замена единственного His-лиганда в кластере 2Fe-2S на Cys стабилизировала кластер, ингибировала перенос кластера на апо-акцепторные белки и подавляла перенос железа в митохондрии.Эти эффекты аналогичны эффектам, ранее обнаруженным для mitoNEET [17], и позволяют предположить, что NAF-1 может быть настоящей митохондриальной мишенью для TZD. Тем не менее, что интересно, натуральный продукт ресвератрол, способствующий антидиабетической активности и долголетию, показал аналогичное влияние на стабилизацию кластеров и ингибирование перегрузки железом, особенно для NAF-1. Эти результаты предполагают ранее неизвестную и важную роль NAF-1 в ответе на окислительный стресс, который, как известно, является основным фактором возникновения диабета типа II и выступает в качестве основной причины старения.
Экспериментальные процедуры
Все материалы, использованные в этой работе, были из лучших доступных коммерческих сортов. Митохондриальный сенсор железа красный родамин B — [(1,10-фенантролин-5-ил) аминокарбонил] бензиловый эфир (RPA) был получен, как описано в [18]. Пиоглитазон (Bosche Scientific, Нью-Брансуик, Нью-Джерси) растворяли в 100% ДМСО и разводили в тестовой среде перед использованием в клеточных анализах. Ресвератрол (Cayman Chemical, Ann Arbor MI) растворяли в 100% этаноле и разводили в тестовой среде перед использованием в клеточных анализах.
Экспрессия и очистка белков NAF-1 и ферредоксина
кДНК NAF-1 человека, кодирующая цитоплазматическую растворимую (NAF-1) часть белка (остатки 57–135), была амплифицирована с помощью ПЦР и субклонирована в модифицированный вектор pET28-a (+) (Novagen, Madison, WI) как описан [1]. Очистку NAF-1 и мутанта h214C проводили, как описано ранее [1]. Экспрессию и очистку ферредоксина (Fd) как в голо-, так и в апо-формах проводили, как описано ранее [19].
УФ-видимая спектроскопия поглощения, кинетика переноса и распады
Спектры поглощения регистрировали при 350-600 нм (CARY, 300Bio), оборудованном устройством контроля температуры, установленным на 37 ° C. Особое внимание было уделено изменениям оптической плотности при 458 нм (характерный пик поглощения [2Fe-2S] NAF-1) и при 423 нм (характерный для кластера [2Fe-2S] в Fd). % CT переноса кластера (%) в любой момент времени определяли из значений отношения A 423 / A 458 следующим образом: CT (%) = (ΔR / ΔR max ) × 100, где ΔR = R начальный −R начальный и ΔR max = R конечный −R начальный .R obs — наблюдаемое соотношение A 423 / A 458 в данный момент времени, R init — начальное соотношение A 423 / A 458 , наблюдаемое в момент времени 0, которое равно 0,85, и R final представляет собой отношение A 423 / A 458 в длительные периоды времени, когда реакция считается завершенной и равной 1,14. Данные нормализованы и соответствуют единственному экспоненциальному убыванию. Начальные скорости переноса определяли путем определения тангенса угла наклона аппроксимации на ранней стадии процесса переноса (10 мин), когда концентрации NAF-1 и апо-Fd все еще были близки к их начальным количествам.Кинетические измерения проводили с использованием эквимолярных концентраций NAF-1 (WT и h214C) и апо-Fd в присутствии 50 мМ Трис pH 8,0, 100 мМ NaCl, 5 мМ DTT и 5 мМ EDTA, если не указано иное. Апо-Fd и DTT предварительно инкубировали в течение 30 мин до начала эксперимента. Затухания проводились при 37 ° C и определялись путем отслеживания потери пика 458 нм со временем. Затем данные соответствовали единственному экспоненциальному росту. Исследования были выполнены с использованием различных концентраций NAF-1 в 100 мМ Bis-tris и 100 мМ NaCl для pH 7.0.
Перенос кластера в Native-PAGE [2Fe-2S] in vitro, анализ
NAF-1 и мутант h214C инкубировали с апо-Fd. Концентрации NAF-1 и апо-Fd составляли 200 мкМ и 400 мкМ соответственно, чтобы можно было четко визуализировать полосы. NAF-1 и апо-Fd инкубировали при интенсивной аэрации в присутствии 100 мМ DTT или 2% β-меркаптоэтанола и 5 мМ EDTA в течение заданных промежутков времени (0–60 мин). Перенос кластера [2Fe-2S] от NAF-1 к апо-Fd затем анализировали с помощью нативного PAGE [17] и затем окрашивали кумасси, чтобы показать присутствие обоих белков.
Клеточная культура
Клетки h9c2 человека выращивали при 37 ° C в 5% CO. 2 в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM; Biological Industries), с добавлением 1% антибиотиков (пенициллин, стрептомицин и амфотерицин), 1% глутамина и 10% фетального телячья сыворотка.
Измерения флуоресценции
КлеткиH9c2 были засеяны до оптимальной плотности 1-2 миллиона клеток перед планшетом — 3 см перфорированы с прикрепленным микроскопическим предметным стеклом. Клетки метили в течение 15 минут при 37 ° C с помощью 1 мкМ RPA в среде DMEM, содержащей 10 мМ буфера HEPES вместо фенолового красного, и с добавлением 10 мкМ десферриоксамина (DFO) (Sigma-Aldrich) для предотвращения гашения зонда загрязняющими веществами. утюг из среды.После промывания средой DMEM-HEPES и буфером для пермеабилизации (PB-120 мМ KCl, 5 мМ фосфатный буфер, смесь MEM-аминокислот Игла, разбавленная 1-500, 10 мМ HEPES, 1 мкМ CaCl2, 1 мМ MgSO4, pH 7,2), клетки были проницаемы в PB с помощью 25 мкМ дигитонина в течение 30 с. Проницаемые клетки промывали PB и помещали в PB, содержащий 2 мМ сукцината и 1 мкМ DFO, для измерений с помощью флуоресцентной микроскопии с использованием микроскопа Zeiss Axiovert 35 (Carl Zeiss Inc, Северная Америка), присоединенного к системе изображения Polychrome V (Till Photonics, Мюнхен). , Германия).RPA (возбуждение 560 нм — излучение 610 нм) [20], как описано в другом месте [21]. DFO (1 мкМ) присутствовал во всех растворах во время измерений проницаемости и флуоресценции, чтобы предотвратить гашение RPA загрязняющим железом. После записи 4-минутного исходного уровня добавляли 0, 5, 10 или 20 мкМ NAF-1 или 20 мкМ мутант h214C и регистрировали изменения флуоресценции в течение 18 минут при 37 ° C с последующим добавлением 5 мкМ FHQ (Sigma- Олдрич), чтобы добиться максимального тушения. Было получено четыре независимых набора данных, и среднее значение из этих четырех наборов показано на графике зависимости флуоресценции от времени.Последовательность флуоресцентных изображений, полученных с помощью микроскопии, анализировали с помощью программы Image J (Национальные институты здравоохранения).
Результаты
Перенос кластера от NAF-1 к акцепторному белку
Чтобы определить, наделен ли NAF-1 способностью переноса кластеров, как и mitoNEET [17], мы использовали предварительно восстановленный апо-Fd в качестве классического акцепторного белка и NAF-1 аа. 57–135 водорастворимый домен в качестве донора кластера. Профили белков, полученные с помощью нативного PAGE (рис. 2, , верхняя панель ), показали постепенное исчезновение красного NAF-1 и сопутствующее появление красного голо-Fd с течением времени, что указывает на перенос кластера [2Fe-2S] из NAF-1 к апо-Fd без изменений соответствующих уровней белка, как показано окрашиванием кумасси синим.Ход переноса на апо-Fd оценивали спектрофотометрически и отображали на фиг.2 Нижняя панель как% CT переноса кластера (%) от времени инкубации (иллюстративные спектры поглощения апо-Fd, NAF-1 и их взаимодействия приведены на рис. S2). Вклад his114 в кластерную лабильность оценивали путем замены his на cys в NAF-1 в положении 114 (мутант h214C на фиг. 2). Это изменение в связывающем домене кластера по существу стабилизировало кластер [2Fe-2S] и заметно снижало его способность переносить кластер 2Fe-2S.
Рис. 2. Перенос кластеров [2Fe-2S] NAF-1 на апоакцепторный белок ферредоксин (апо-Fd).
Верхняя панель . NAF-1 инкубировали при 37 ° C с DTT-восстановленным апо-Fd в течение увеличивающегося времени (0, 3, 7,5, 15 и 30 минут), и продукты обрабатывали на нативном геле. Полосы красного цвета указывают на кластер [2Fe-2S] в двух белках. Диаграммы слева показывают структуру белка [2Fe-2S] NAF-1 (вверху слева) и структуру белка [2Fe-2S] ферредоксина (внизу справа) (обозначенного как holo-Fd с [2Fe- 2S] граница кластера).Замена однокоординирующего His114 в NAF-1 на Cys (h214C) показывает отсутствие переноса на апо-Fd через 60 минут (обозначено как h214C 60 минут). Кроме того, в качестве ссылки использовался holo-Fd (полоса справа). Окрашивание кумасси нативного геля непосредственно под ним показывает аналогичные уровни белка в период экспериментов. Нижняя панель . Процент переноса кластера (CT%) от NAF-1 дикого типа или мутировавшего h214C NAF-1 к апо-Fd определяли по данным спектроскопии поглощения в УФ-видимой области, полученным путем отслеживания реакции переноса в режиме онлайн при 458 нм (голограмма Пик поглощения NAF-1) и при 423 нм (пик поглощения голо-Fd) и расчеты, как описано в экспериментальных процедурах.Данные WT соответствовали экспоненциальному росту, поскольку кинетика проявляла каталитическое поведение. Данные по h214C соответствовали линии, поскольку реакция была очень медленной по сравнению с WT.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0061202.g002
Зависимость переноса кластера от окислительно-восстановительного состояния НАФ-1 и акцептора
Для оценки химических требований NAF-1 для донорства / переноса кластеров мы сначала определили спектрофотометрически, что перенос происходит только тогда, когда NAF-1 был предварительно подвергнут окислительным условиям (рис.3) и апо-Fd в восстанавливающих условиях. Переноса не наблюдалось, когда кластеры NAF-1 восстанавливались предварительной обработкой дитионитом, тогда как воздействие кислорода окружающей среды приводило к окислению кластера и сопутствующему переносу кластера 2Fe-2S (рис. S2). Кинетика переноса (рис. 3) обеспечила расчетную начальную скорость 136 ± 20 M -1 мин -1 , аналогично тому, что было обнаружено с mitoNEET [17] или для других белков ISC [22].
Рис. 3. Переход от NAF-1 происходит только для окисленного состояния кластера в восстановленное состояние апо-Fd.
Верхняя панель . NAF-1, предварительно восстановленный дитионитом, неспособен переносить свой кластер на апо-Fd, как это было проанализировано с помощью абсорбционной спектроскопии в УФ-видимом диапазоне. Окисление кластера при добавлении кислорода способствует переносу кластера.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0061202.g003
Чтобы лучше имитировать клеточные условия, мы подвергли белки более физиологичному восстановителю глутатиону (GSH) [23], который содержится в клетках. ~ 5 мМ и вместе с НАДФН способствует окислительно-восстановительной способности клеток [24].Мы обнаружили, что GSH (но не GSSG) в физиологических концентрациях может активировать апо-акцептор и значительно усиливать перенос с течением времени (рис. 4). Следовательно, перенос кластера действительно жизнеспособен в клеточных условиях.
Рис. 4. Перенос кластера может происходить в присутствии биологического восстановителя глутатиона.
Важно знать, может ли перенос кластера происходить в присутствии биологического восстановителя глутатиона. Поэтому анализы переноса кластера проводили in vitro при 37 ° C в присутствии 5 мМ глутатиона (GSH) в течение определенного периода времени, а затем анализировали с помощью Native PAGE.Fd с его кластером [2Fe-2S] (holo-Fd) был запущен в качестве эталона. Верхний гель не окрашен и показывает перенос кластера [2Fe-2S] видимыми красными полосами на геле. Нижняя панель — тот же гель после окрашивания Кумасси.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0061202.g004
Перенос железа из NAF-1 в интактные митохондрии
Способность NAF-1 к переносу кластера также оценивалась в клетках млекопитающих с использованием митохондрий в качестве потенциального органеллярного акцептора лабильного железа.С этой целью мы использовали клетки, дважды флуоресцентно меченные сенсорами железа [25]: красный родамин B — [(1,10-фенантролин-5-ил)] бензиловый эфир (RPA) для отслеживания лабильного железа в матриксе митохондрий [20], и кальцеин-зеленый (CALG) для отслеживания лабильного железа в цитоплазме [20]. Чтобы сделать митохондрии доступными для NAF-1, мы сначала сделали клетки проницаемыми по протоколу, который сохранил митохондрии нетронутыми и функциональными, поскольку они сохраняли потенциометрический зонд железа RPA, теряя при этом большую часть цитозольного кальцеина [21].Фиг. 5 (, верхняя панель ) изображает изображения флуоресценции, полученные с течением времени после добавления либо NAF-1 (представлены только профили 0 мкМ и 20 мкМ), либо NAF-1, мутировавшего h214C (20 мкМ). Фиг. 5 (, нижняя панель, ) изображает зависящие от времени изменения интенсивности флуоресценции RPA на клетку, анализируемую по флуоресцентным изображениям, как показано на фиг. 5 (верхняя панель). На рис. 5 , верхняя и нижняя панели показывают, что добавление NAF-1 к клеткам, меченным RPA, вызывало зависящее от времени гашение митохондриальной флуоресценции RPA, указывая на лабильный перенос железа от NAF-1 в митохондриальный матрикс, где RPA сильно локализован [ 18], [25].Перенос лабильного железа зависел от концентрации в диапазоне 0–20 мкМ NAF-1 дикого типа, тогда как применение NAF-1, мутировавшего h214C, не приводило к детектируемому переносу кластера в митохондрии даже при самых высоких используемых концентрациях. В данной серии исследований (рис. 5 , верхняя и нижняя панели ) мы использовали мембранопроницаемый комплекс лабильного железа, FeCl 3 -8-гидроксихинолин (FHQ), в качестве экспериментального инструмента для оценки максимально достижимого тушение флуоресценции митохондрий RPA [18].
Рис. 5. Перенос лабильного железа из NAF-1 в митохондрии.
Верхняя панель . Псевдоцветные изображения проницаемых клеток h9c2, меченных красным родамином B — [(1,10-фенантролин-5-ил)] бензиловый эфир (RPA) для обнаружения следов железа в митохондриальном матриксе, а затем измерения флуоресценции каждые две минуты. NAF-1 (WT или мутированный h214C) добавляли до концентраций 0, 5, 10 или 20 мкМ через 4 минуты (показаны только профили 20 мкМ). Псевдоцвет клеток указывает относительные уровни митохондриальной флуоресценции RPA (оранжевый: высокий; синий: низкий).Жирорастворимый пермеант FHQ добавляли до 5 мкМ через 22 мин для достижения максимального гашения. Нижний . График флуоресценции RPA дан в условных единицах (а.е.), полученных путем анализа флуоресценции отдельных клеток с помощью изображения J, как описано в экспериментальных процедурах. Флуоресценция RPA — это среднее значение четырех независимых прогонов.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0061202.g005
Чувствительность кластера NAF-1 и способности переноса железа к антидиабетическим препаратам
Тот факт, что NAF-1 имеет сходные структурные мотивы и биофизические свойства с mitoNEET, который, в свою очередь, демонстрирует чувствительность к антидиабетическому пиоглитазону [2], [13], заставил нас рассматривать NAF-1 как потенциальную мишень для препаратов TZD.Более того, компьютерное моделирование стыковки малых молекул с членами семейства CISD [26], [27] позволило выявить препараты TZD пиоглитазон и розиглитазон, а также натуральный продукт ресвератрол, способствующий долголетию, в качестве потенциально высокоаффинных связывающих партнеров [26]. Эти свойства привели нас к сравнительной оценке эффектов пиоглитазона на NAF-1 по сравнению с mitoNEET с использованием вышеупомянутых анализов. Данные, представленные на рис. 6, по существу резюмируют основные результаты, полученные ранее с помощью mitoNEET [17], в отношении блокирования как спонтанного распада кластера (рис.6A и B) и перенос кластера в митохондрии, меченные RPA (рис. 6C). Добавление пиоглитазона к NAF-1 при pH 7,0, где кластеры [2Fe-2S] являются pH-лабильными, привело к почти 5-кратной стабилизации кластера, поскольку оно увеличивало t 1 / 2 потери кластера с От 1000 ± 160 мин до 4700 ± 350 мин (рис. 6А). Примечательно, что инкубация NAF-1 с антидиабетическим лекарственным средством пиоглитазоном перед добавлением к клеткам, меченным RPA (как показано на фиг.5), аннулировала изменение флуоресценции RPA, вызванное NAF-1 (фиг.6С). Это новое открытие идентифицирует NAF-1, человеческий паралог mitoNEET [17], как возможную вторую митохондриальную мишень для препаратов TZD, проясняя загадку, предложенную недавно [13]. Мы также проверили способность ресвератрола связывать белок NAF-1 и обнаружили, что он увеличивает t 1 / 2 спонтанного разложения с 1000 ± 160 мин. до 6800 ± 500 мин. Достижение 7-кратной кластерной стабилизации аналогично тому, что наблюдалось выше, а также при использовании пиоглитазона TZD на mitoNEET [2].Более того, натуральный продукт ресвератрол также отменял перенос кластера из NAF-1 в митохондрии (фиг. 6C), указывая на то, что также в клетках он действовал на NAF-1 аналогично пиоглитазону TZD. Интересно, что ресвератрол не вызывал заметной стабилизации кластера mitoNEET [2Fe-2S] в диапазоне pH 6,0–7,5 (данные не показаны).
Рис. 6. Влияние пиоглитазона и ресвератрола на NAF-1: кластерная стабилизация и прекращение переноса железа в митохондрии.
Верхняя панель. Кинетику стабильности NAF-1 в отсутствие и в присутствии пиоглитазона контролировали спектрофотометрически (458 нм) при 37 ° C и pH 7,0 (NAF-1 и пиоглитазон по 20 мкМ каждый). Время полураспада поглощения, соответствующего кластеру NAF-1 (2Fe-2S), было увеличено пиоглитазоном с t 1/2 = 1000 ± 160 мин (темные кружки) до t 1/2 = 4700 ± 350 мин (белые кружки). Аналогично, 20 мкМ ресвератрол задерживал разложение кластера NAF-1 с t 1/2 = 6800 ± 500 мин (белые кружки). Нижний . Влияние лекарств на способность NAF-1 переносить лабильное железо в митохондрии, меченные RPA, с использованием проницаемых клеток h9c2. Сбор данных, анализ флуоресцентных изображений и построение графиков были выполнены, как описано в легенде к фиг. 5. Добавление NAF-1 (10 мкМ) к проницаемым клеткам, меченным RPA, через 4 мин приводило к быстрому тушению RPA (красный), тогда как добавление Отсутствие (синий) было устойчивым до добавления проникающего FHQ (5 мкМ) через 22 мин, что привело к максимально достижимому гашению.Добавление NAF-1, предварительно инкубированного с ресвератролом (20 мкМ) (пурпурный) или пиоглитазоном (желтый), отменяет перенос кластера, о чем свидетельствует отсутствие гашения флуоресценции RPA, опять же, до тех пор, пока система не подвергнется воздействию проникающего FHQ.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0061202.g006
Обсуждение
Мы идентифицировали NAF-1, который, как известно, играет роль в ингибировании аутофагии [10] и способствует долголетию [7], [8] и чье клеточное отсутствие приводит к многочисленным патологиям [9] как [2Fe- 2S] белок-переносчик кластера (рис.2). Его способность к переносу кластера возникает только тогда, когда кластер окисляется [2Fe-2S] 2+ , а апоакцептор восстанавливается химическими восстанавливающими агентами или, что более важно, физиологическими агентами, такими как глутатион (рис. 3 и 4). Хотя его основная структура похожа на mitoNEET и обладает некоторыми функциональными и фармакологическими свойствами [1], [2], [17], NAF-1 имеет отчетливую поверхность белка (рис. S1) и отличается своим участием в здоровье. и болезнь. Тем не менее, он разделяет связывание с препаратом против диабета типа II, пиоглитазоном, который первоначально использовался для идентификации mitoNEET как основной клеточной мишени [11].Недавно было высказано предположение, что TZDs действуют также на дополнительный митохондриальный компонент, поскольку связывание все еще происходит при нокауте mitoNEET у животных [13]. В настоящей работе мы обеспечиваем положительную идентификацию NAF-1 как мишени пиоглитазона и важной потенциальной физиологической мишени TZD в митохондриях. Более того, мы показываем, что связывание лекарственного средства TZD отменяет способность передачи кластера от NAF-1 к акцепторным белкам и митохондриям (рис. 6). Это открытие может иметь физиологические и фармакологические последствия для различных расстройств, в которые вовлечен NAF-1 [9].Следуя этому руководству, мы экспериментально подтвердили, что ресвератрол действительно может стабилизировать кластер NAF-1 (но не mitoNEET) [2Fe-2S] и тем самым также препятствовать его переносу в митохондрии (рис. 6). Это открытие подчеркивает важность того, что небольшие молекулы, которые по-разному связываются с mitoNEET или NAF-1, помогут выяснить вероятную многофункциональную роль этих белков в здоровье и болезнях — задачу, которую мы активно преследуем.
Дополнительная информация
Рисунок S1.
Структурное сравнение NAF-1 и mitoNEET. ( A ) Ленточные диаграммы растворимых частей NAF-1 и mitoNEET (аминокислоты 57–135 и 33–108 соответственно), полученные из опубликованных рентгеновских анализов (1,2,1), выделяющих ароматические поверхностные остатки. Различия в составе боковых цепей приводят к различиям в поверхности двух белков, что приводит к избирательному связыванию ресвератрола и других потенциальных малых терапевтических молекул. (B) Аминокислотные последовательности NAF-1 и mitoNEET: буквы зеленого цвета обозначают водорастворимый С-конец, черные буквы обозначают трансмембранный сегмент, а растворимая часть, обращенная к цитоплазме, показана розовым цветом.Символы обозначают уровень сходства между аминокислотами: звездочка — идентичность; толстая кишка, высокое сходство; период, плохое сходство; ни приметы, ни сходства. Синяя линия над последовательностью, соответствующей растворимой части последовательности, указывает элементы вторичной структуры: стрелка для бета-листа и толстая линия для альфа-спирали. Тонкие линии указывают на отсутствие вторичной структуры. (C) Ароматические боковые цепи, наложенные на структуры основной цепи. Обратите внимание, что боковые цепи, отражающие поверхность белка, значительно отличаются.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0061202.s001
(TIF)
Рисунок S2.
NAF-1 передает свой кластер только тогда, когда его [2Fe-2S] кластеры находятся в окисленном состоянии. (A) Apo-Fd предварительно инкубируют с DTT, чтобы гарантировать доступность цистеиновых боковых цепей акцепторного белка для координации кластера. В этих условиях NAF-1 снижается, а перенос кластера ингибируется, о чем свидетельствует отсутствие каких-либо изменений в видимых спектрах NAF-1 с течением времени.Спектр апо-Fd показывает полную потерю кластера (цвет морской волны, <0,05 единиц поглощения). (B) Через 300 мин к раствору добавляется кислород, и перенос кластера происходит легко. Видимые спектры показывают, что NAF-1 быстро окисляется при добавлении кислорода (черный), и кластер со временем превращается в апо-Fd (синий, красный). Видимый след апо-NAF-1 показывает полную потерю кластера (серый цвет, <0,05 единиц поглощения).
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0061202.s002
(TIF)
Вклад авторов
Задумал и спроектировал эксперименты: ST JAZ MLP RM ZIC PAJ RN.Проведены эксперименты: ST JAZ LA ARC DM YH. Проанализированы данные: ST JAZ CHL MLP ZIC PAJ RN. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: ZIC PAJ RN. Написал статью: ST JAZ CHL MLP ZIC PAJ RN.
Список литературы